邵驾宇 章慧娣 潘嘉林 尤小寒 薛向阳 黄朝兴

●论 著

与肾小管上皮转分化相关的miRNA的初步筛选

邵驾宇 章慧娣 潘嘉林 尤小寒 薛向阳 黄朝兴

目的 观察miRNA在大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）发生上皮-肌成纤维细胞转分化（EMT）过程中的变化，筛选与肾小管上皮细胞转分化相关的miRNA。方法体外培养NRK-52E，用5 ng/ml转化生长因子-β1（TGF-β1）分别作用0、3、6、12、24、48 h，以0 h为空白组（BC组），余为TGF-β1组。倒置相差显微镜观察细胞形态学变化；real-time PCR法检测细胞内α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E钙蛋白（E-cad）、1型胶原（ColⅠ）和纤连蛋白（FN）的mRNA表达水平；Western blot法检测细胞内α-SMA的表达水平；ELISA法检测上清液中FN的含量；茎环实时荧光定量PCR法检测6条miRNA在细胞内的表达水平。结果与BC组比较，TGF-β1组部分细胞失去原有的鹅卵石形态，转变成成纤维细胞特有的梭形；细胞内α-SMA、ColⅠ和FN的mRNA表达上调，E-cad的mRNA表达下调，细胞内α-SMA表达量增多，细胞上清液中FN含量升高（均P＜0.05）；miR-30d、miR-132和miR-21的表达上调，miR-200b、miR-192和miR-10b的表达下调（均P＜0.05）。结论TGF-β1可诱导NRK-52E发生EMT。miR-30d、miR-132、miR-21、miR-200b、miR-192和miR-10b可能参与大鼠肾小管上皮细胞EMT，值得进一步研究。

大鼠肾小管上皮细胞 肾小管上皮转分化 转化生长因子-β1 microRNA

肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis，RIF）的基本病理特征是细胞外基质（extracellular matrix，ECM）在肾间质大量堆积。肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化（epithelial-myofibroblast transdifferentiation，EMT）是造成ECM堆积的主要原因之一。目前已有一些动物实验显示部分miRNA参与肾小管上皮细胞EMT。我们在前期的动物体内实验基础上，以体外培养的大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）为研究对象，在转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）作用下，观察miR-132、miR-21、miR-10b、miR-200b、miR-192和miR-30d这6条miRNA在NRK-52E发生EMT过程中的改变，以期认识这些miRNA是否参与调控肾小管上皮细胞分泌ECM的过程。……