刘长富，郭 志，司同国，邢文阁，刘 方，于海鹏

高迁移率族蛋白B1（high mobility group protein B1，HMGB1）是一种存在于真核生物细胞内的非组蛋白染色体结合蛋白，参与包括基因转录、DNA修复等多种生物学过程［1-2］，释放至细胞外的HMGB1可作为内源性免疫调节因子，影响免疫反应的启动和激烈程度［3-4］。相关研究显示，HMGB1在多种肿瘤细胞中呈高表达［1，5-7］，冷冻消融治疗是否能在导致大量肿瘤细胞坏死的同时使肿瘤细胞内的HMGB1释放至细胞外，这些释放的HMGB1是否能促进树突状细胞（DC）数量增加及增高其活化程度，进而对冷冻免疫反应产生影响，目前尚少见相关研究报道。

1 材料与方法

1.1 细胞系及实验动物皮下移植瘤模型建立

小鼠前列腺癌细胞 （RM-1）株由上海中科院细胞库提供。清洁级纯种近交系C57BL/6（H-2Db/b）雄性小鼠50只，6～8周龄，体重18～22 g，购自中国科学院天津血液病研究所实验动物中心。取对数生长期的RM-1细胞，调细胞浓度至5×106个/ml。取雄性C57BL/6小鼠，用1 ml注射器将0.1 ml肿瘤细胞接种于右腹股沟皮下，每3 d观察肿瘤生长情况。

1.2 实验分组

将50只RM-1细胞激素非依赖性前列腺癌模型小鼠随机分为对照组25只，不予任何治疗；治疗组25只，给予冷冻消融治疗。

1.3 氩氦冷冻消融治疗技术操作步骤

接种肿瘤后第2周（肿瘤直径约1 cm），于荷瘤鼠腹腔内注射10%水合氯醛（3.5 ml/kg）麻醉后，仰卧固定于操作台上。采用的氩氦冷冻消融系统（CryocareTMSurgical System）为美国Endocare公司产品。右侧腹股沟处常规消毒、铺巾，在瘤旁切一小口，直视下将直径1.7 mm的氩氦冷冻探针刺入肿瘤组织内6～8 mm。启动氩气，工作压力17 225 kPa（2 500 psi），初始功率均为20%条件下，冷冻时间为30 s，冰球完全覆盖肿瘤，可见肿物表面完全覆盖冻霜，中央温度可达－120℃，启动氦气复温至10℃，为第1个冷冻循环。……