沈熊，陆继伟，梁健，杨春欣，吕迁洲*

(1.复旦大学附属中山医院药剂科，上海 200032;2.上海市食品药品检验所，上海 201203)

蒽醌类化合物为大黄主要有效成分［1］，对其药代动力学的研究已有报道，其中血药浓度测定多采用高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)［2］、高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)［3］或超高效液相色谱法(UPLC)［4］等;用高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)测定大黄药材中蒽醌的方法已有文献报道［5］，但用于测定血浆中大黄活性成分尚未见报道。HPLC-FLD 具有比HPLC-UV 灵敏度高、同时又比HPLC-MS/MS 成本低的优点。

质量源于设计(quality by design，QbD)是由美国食品和药品管理局(FDA)引入的概念，药品设计决定最终质量的理念已逐渐为业界所接受［6］，并形成了与之对应的设计模式。其主要目的为:建立设计空间(即各种影响质量的关键因素及参数的范围组合和交互作用)，并借此拓展出灵活的管理办法。QbD 理念最初主要用于药品制备的工艺设计，近年来，建立设计空间的概念已逐渐应用于色谱分析等领域［7-9］。鉴于此，本研究尝试采用QbD 理念，用Plackett-Burman 设计筛选影响色谱分离的主要因素，进而选用Box-Behnken 设计-响应面法优化测定大鼠血浆中5种大黄蒽醌的HPLC-FLD 方法。

1 实验部分

1.1 仪器、试药与动物

Waters 高效液相色谱仪(1525泵，2707自动进样器，1500柱温箱，2475荧光检测器，Breeze2色谱工作站)。对照品芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚均购自中国食品药品检定研究院，甲醇为色谱纯，实验用水为超纯水，其余试剂为分析纯。大黄蒽醌提取物为自制。

清洁级SD 大鼠，体重180～200 g，由复旦大学实验动物科学部提供，合格证号:SCXK(沪)2009-0019，实验前适应1周，大黄蒽醌提取物适量口服灌胃给药。……