张国强， 彭敏霞， 王晔恺， 周吉航， 曾 芳

(舟山医院1肝胆外科，2超声科，3检验科，4细胞分子生物学实验室，舟山 浙江316004)

转移抑制基因23 - H1(non - metastasis 23 -H1，nm23 -H1)参与肿瘤细胞的侵袭和转移过程。在多种肿瘤中如结肠癌［1］、前列腺癌［2］、非小细胞肺癌［3］中，抑癌基因nm23 -H1 的低表达与肿瘤侵袭、转移及患者预后高度相关，并且体外胃癌细胞株从低侵袭性的悬浮态向高侵袭性的黏附态转化中也出现胞内nm23 -H1 的表达降低［4］。地西他滨(decitabine，DCA)和丙戊酸钠(valproic acid，VPA)是2 种不同机制的表观遗传学药物，在多种肿瘤细胞中可联合诱导细胞凋亡和周期阻滞［5］。我们通过2 种药联用观察其对胃癌MGC -803 抑癌基因nm23 -H1表达的影响，探讨其对细胞凋亡、周期影响的可能机制。

材 料 和 方 法

1 药品、试剂和仪器

地西他滨(5 - 氮杂-2' - 脱氧胞嘧啶核苷粉剂)购自Sigma，注射用丙戊酸钠(德巴金针)购自赛诺菲-安万特公司，FITC 标记的膜联蛋白-碘化丙啶(Annexin V/PI)凋亡试剂盒、细胞周期分析试剂盒购自BD，DNA 提取纯化试剂盒购自Promega，Trizol购自Invitrogen，One Step SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR 试剂盒购自TaKaRa，小牛血清和RPMI -1640 培养液购自碧云天生物技术研究所。nm23 -H1 上游引物5’-TGGTGAAGACGGGCCGAGTCA -3’，下游引物5’-ATCAGATGGTCGGGGATGGTAACAC-3’，产物长度382 bp。GAPDH 上游引物5’-AAGGTGAAGGTCGGAGTCAAC-3’，下游引物5’-GGGGTCATTGATGGCAACAATA - 3’，产 物 长 度102bp。荧光PCR 仪为ABI 7500，CO2培养箱为德国Jouan IG150 产品，流式细胞仪为BD FACSCalibur 产品，获取软件为CellQuest，细胞周期分析软件为Flowjo，冰冻离心机为Eppendorf 5714R。

2 方法

2.1 细胞培养及药物处理 胃癌细胞株MGC -803购自中科院上海细胞库。用含10%小牛血清、100 U·L-1青霉素、100 mg·L-1链霉素的RPMI -1640培养液在37 ℃、5%CO2培养箱中培养，取对数期细胞备用。配制密度为1 ×108/L 的细胞悬液接种于6孔培养板，每孔2 ml，置37 ℃、5%CO2、饱和湿度培养箱中……