杜 玲，孙 俊，刘建生，程计林△

(1上海市公共卫生临床中心消化科，2上海瑞金医院集团闵行区中心医院消化科，上海 201508)

金属蛋白酶组织抑制物－1(tissue inhibitor of metalloproteinase－1，TIMP－1)由激活的肝星状细胞、肝细胞和内皮细胞分泌表达，其主要作用是抑制胶原酶的活性，同时抑制基质分解素和明胶B[1－2]。TIMP－1可以抑制大部分基质金属蛋白酶 (matrix metalloproteinases，MMPs)，尤其是MMP－1的活性，使细胞外基质(extracellular matrix，ECM)降解减少，促进肝纤维化的形成，被认为在肝纤维化进程中发挥了重要的作用[1－3]。大量研究显示，肝组织内TIMP－1水平与肝组织炎症和肝纤维化程度呈密切相关关系。已有研究表明抑制TIMP－1活性能缓解甚至抑制肝纤维化进程，因而TIMP－1成为抗肝纤维化免疫治疗的一个重要靶点[1－5]。

TIMP－1蛋白约28.5 kD，其编码基因位于X染色体p11区，含有1个开放读码区，编码208个氨基酸，蛋白的N端为主要活性区域[1－2，5－7]。基于 TIMP － 1 的一级结构，利用生物信息学技术预测TIMP－1 B细胞表位，采用8分支多重抗原肽(multiple antigen pepetide，MAP)系统设计合成多抗原肽[8－9];以白细胞介素1β(interleukin－1 beta，IL －1β)163 －171肽作为通用型辅助表位肽(T－helper epitope，TH)，能增强其它抗原肽的细胞免疫和体液免疫反应[10－12]。将二者联合起来免疫动物，诱导产生多克隆抗体，应用间接酶联免疫吸附测定、免疫印迹及免疫组化鉴定多克隆抗体滴度、特异性及其抗原在组织细胞中的表达，从而获得潜在的B细胞表位肽，为以TIMP－1为靶标的抗纤维化免疫治疗研究提供前期实验依据。

材料和方法

1 材料

商品化TIMP－1重组蛋白(北京义翘神州生物技术有限公司，货号为10934－HNAH);商品化抗体为多克隆兔抗人TIMP－1蛋白抗体……