吴志勇，孙胜杰，焦顺昌（解放军总医院肿瘤内科， 北京 100853）

HER-2（human epidermal growth factor receptors-2）基因的过度表达是乳腺癌的重要预后不良因素。曲妥珠单抗（赫赛汀，trastuzumab）是以HER-2/neu蛋白为靶点设计的人源化单克隆抗体。大量研究表明，曲妥珠单抗可明显提高化疗对HER-2/neu过度表达乳腺癌的疗效，并可广泛应用于治疗的各个阶段[1]。但是在联合治疗方案中，曲妥珠单抗的使用最佳时机仍有待明确，因此，我们设计了关于曲妥珠单抗联合化疗序贯方式研究的系列实验，已报道的曲妥珠单抗与多西他赛、吉西他滨的序贯联合应用的结果，与临床应用情况基本吻合[2-4]。本文旨在寻找曲妥珠单抗与顺铂联合应用的最佳序贯方式，并初步探讨其机制，从而为临床治疗提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 药品和试剂 MI/1640培养液（美国GIBCO公司）；胎牛血清（北京元亨圣马生物技术研究所）；MTT（美国AMRESCO公司）；顺铂（齐鲁制药）；曲妥珠单抗（上海罗氏制药）。

1.1.2 主要设备 二氧化碳孵箱（美国Baxter）；96孔板（美国COSTOR3599）；酶标仪（上海雷勃分析仪器有限公司，型号：Multiskan MK3353）；YKH2 Ⅱ型液体快速混合器（江西医疗器械厂）。

1.2 方法

人乳腺癌细胞珠MDA-MB453其Her-2/neu基因扩增为阳性，由解放军总医院肿瘤内科提供，用细胞计数板计数活细胞数。

1.2.1 MTT 法测定药物作用抑制率 将2.0×104个细胞接种于96 孔板（200 μL/孔），培养24 h；将药物按照不同浓度加入，共培养60 h；加入5% MTT 20 μL/孔，4 h后加入DMSO 200 μL/孔，振荡；用酶标仪（波长492 nm） 测定OD 值，最后结果取均值，以未处理组作为对照组，按下列公式计算各组的抑制率:抑制率（%） = 1– （实验组OD492/ 对照组OD492）×100 %。

1.2.2 MTT法测定顺铂与曲妥珠……