燕宪涛 路新国 章海风 丁连翠 吴志嵩

枸杞、菊花是中医眼科的常用药，同时又属于卫生部公布的“药食兼用”物品。本研究通过观察枸杞菊花散不同剂量对老年SD大鼠视网膜各层细胞的影响，探讨其保护视功能的可能机制，为药膳的进一步开发和临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组

清洁级健康无眼疾SD雄性大鼠50只，由扬州大学比较医学中心提供，合格证号：SCXK（苏）2007-0001。 其中 2～3月龄大鼠 10只，体重 180～300g，为青年空白对照组。18～20月龄大鼠40只，体重320～600 g，随机分为老年空白对照组，枸杞菊花散低、中、高剂量组，每组10只。

1.2 药物制备

宁夏枸杞子、杭白菊购于扬州市大德生药房，药材来源、质量经专家鉴定合格。宁夏枸杞子、杭白菊除杂后干燥，按1∶1的质量比用中药粉碎机粉碎混匀，制成枸杞菊花散。最后用煮开的蒸馏水调整至所需浓度，现配现用。

1.3 主要试剂与仪器

LEⅠCA RM2245 切片机（徕卡公司）；电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；OLYMPUS JAPAN 207153显微镜；甲醛（AR）（上海苏燃化学试剂有限公司，批号 201103）。

1.4 方法

1.4.1 分组给药：枸杞菊花散低、中、高剂量组予枸杞菊花散水煎液灌胃，给药剂量分别为1 g/kg、2 g/kg、4 g/kg（生药/大鼠体质量），于每天上午 8∶30～9∶30灌胃1次。空白对照组灌胃等量的生理盐水，其余时间自由饮水进食。所有动物连续灌胃35 d后全部处死取材。

1.4.2 标本采集与处理：末次给药后禁食不禁水12 h，颈椎脱臼法处死后，迅速摘取左眼球，分组标记放入福尔马林液中固定24 h，常规脱水、透明，60℃石蜡液浸蜡，垂直包埋，石蜡切片机连续切片，厚度4 μm，行常规HE染色。

1.4.3 细胞计数：HE染色病理切片置于光学显微下观察视网膜组织各层细胞，400倍放大照相，每张切片选5个不同视野计数，取平均值。

1.5 数据处理

2 结果

2.1 病理切片

青年空白对照组大鼠视网膜10层结构清晰可辨，各层排布致密整齐，同层细胞大小一致、密度均匀。与青年空白对照组相比，老年空白对照组和老年低剂量组大鼠视网膜外核层及神经节细胞层的细胞数目有不同程度的减少，排列也较松散；而老年中、高剂量组与青年空白对照组大鼠视网膜结构排布及细胞密度等方面均无明显差异（图1）。

2.2 视网膜细胞计数比较

各组间内核层细胞数目接近，差异无统计学意义（P＞0.05）（表1）。

与青年空白对照组比较：（1）神经节细胞层：枸杞菊花散低剂量组细胞计数明显降低（P＜0.01），中、高剂量组略降低（P＞0.05）。 （2）外核层：低、高剂量组细胞计数明显降低（P＜0.01），中剂量组略降低（P＞0.05）（表1）。

与老年空白对照组比较：（1）神经节细胞层：枸杞菊花散低剂量组细胞计数略升高（P＞0.05），中、高剂量组明显升高（P＜0.01）。 （2）外核层：低剂量组细胞计数略升高（P＞0.05），中、高剂量组明显升高（P＜0.01）（表1）。

表1 各组大鼠视网膜神经节细胞层、内核层和外核层细胞计数（±s，样本数=8）

表1 各组大鼠视网膜神经节细胞层、内核层和外核层细胞计数（±s，样本数=8）

注：1.对比组间凡标有相同字母者，P＞0.05；2.无相同字母而有相邻字母者，P＜0.05；3.字母既不相同也不相邻者，P＜0.01。

组别细胞计数神经节细胞层 内核层 外核层青年空白对照组 8.375±1.486 8c 35.975±1.761 3a 84.813±3.998 7f老年空白对照组 4.250±0.639 2a 35.775±1.082 0a 69.275±4.578 1a枸杞菊花散低剂量组 5.025±0.391 9a 34.625±2.374 7a 73.250±5.263 1ab枸杞菊花散中剂量组 8.175±0.788 8c 36.200±2.800 0a 80.550±4.084 5df枸杞菊花散高剂量组 8.000±1.136 4c 34.550±3.598 0a 78.575±4.375 8cd

3 讨论

老年性视功能衰退是一种衰老现象，中医认为与年老肝阴衰减有关。如《素问·阴阳应象大论》谓：“年四十而阴气自半也，起居衰矣。年五十，体重，耳目不聪明矣”；《灵枢·天年》云：“五十岁，肝气始衰，肝叶始薄，胆汁始减，目始不明”。国外有研究表明，随年龄增长，视野光敏感度逐渐下降，视网膜电图振幅下降，暗适应时间延长〔1-2〕。国内卢艳等观察增龄大鼠视网膜变化时发现，大鼠视网膜神经节细胞层细胞数目及外核层细胞数目均随年龄增长呈下降趋势〔3〕。提示老年性视功能衰退伴随有视网膜各层细胞的变化。

枸杞子和菊花均为具有明目作用的中药，二者合用具有清热解毒，益精明目的功效。其中枸杞子甘、平，归肝、肾经，其主要成分枸杞多糖，具有免疫调节、抗衰老、降血脂、降血糖、护肝、抗疲劳、抗肿瘤、降血压等作用〔4〕。 菊花辛、甘、苦，微寒，归肺、肝经。菊花含多种挥发油，多糖菊苷、腺嘌呤、胆碱、黄酮、水苏碱、维生素A、维生素B1、维生素E、氨基酸及刺槐素等〔5〕，具有保护心血管、抗病毒、抗衰老、抗炎、抗肿瘤作用等〔6〕。我们将其组方为枸杞菊花散，观察其对大鼠视网膜各层细胞的影响。结果显示，枸杞菊花散高、中剂量大鼠视网膜神经节细胞层、外核层细胞数目明显高于老年空白对照组（P＜0.01）。其中老年中剂量组与青年空白对照组大鼠视网膜各层细胞数目相差无几（P＞0.05）。可见中药枸杞菊花散可以延缓大鼠视网膜神经节细胞层及外核层细胞衰减，从而具有延缓老年性视力衰退的作用。选择最佳的计量与配比是我们下一步研究的一个方向。

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