何 允，肖 雄，邓玉金，赵海龙，李跃民

(西南大学动物科技学院胚胎工程研究室，重庆 400715)

卵母细胞的激活是动物克隆技术中的关键步骤之一，应用于细胞核移植及孤雌胚胎干细胞分离培养等环节，可通过不同途径实现[1]。其中SrCl2作为一种常用激活剂，能够对MⅡ期卵母细胞进行化学激活[2]。在激活处理过程中，透明带不为胚胎活化发育所必须[3]，且去透明带卵母细胞孤雌激活率高于全胚细胞直接激活率[4]。故本实验采用不同浓度SrCl2激活剂对去透明带卵母细胞进行激活，在最适作用时间条件下讨论浓度对激活效果及发育率的影响。此外本实验对孤雌胚胎体外条件培养体系进行了优化，将常规培养液培养发育效果与添加LIF因子培养液培养发育效果进行了比较。

1 材料与方法

1.1 实验动物及主要试剂

实验动物为6～8周龄性成熟昆明系小鼠，购自重庆市中药研究所。

主要试剂:孕马血清促性腺激素(PMSG)及人绒毛膜促性腺激素(hCG)为宁波第二激素厂生产，SrCl2、LIF因子及其他药品均购自Sigma公司。

1.2 MⅡ期卵母细胞的获取

雌性小鼠经腹腔注射PMSG10IU/只，48h后注射hCG 10IU/只。注射hCG18h后颈椎脱臼处死小鼠，常规外科方法无菌获取输卵管。所得输卵管以M2液漂洗3遍后，撕破膨大部收集卵丘－卵母细胞复合体，以0.1%透明质酸酶37℃处理3～5min获得卵母细胞。

1.3 卵母细胞去透明带处理

将上述卵母细胞以0.5%链霉蛋白酶37℃处理1min，待透明带分层膨胀后以内径略小于透明带的吸管轻轻吹打至透明带脱落，所得裸卵细胞经M2液洗涤后放入37℃、5%CO2培养箱中备用。……