苏位君, 王宝玉，宋祥和，王丽娜 ，刘艳华，周曼倩，童玲玲, 李宗金

1南开大学医学院病理学系，天津 3000712南开大学人民医院内分泌科，天津 300121 3山东省日照市中医院心内科，山东日照 276800 4南开大学医学院免疫学系，天津 300071 5南开大学医学院病理生理学系，天津 300071

·论著·

改良三维条件下人胚胎干细胞向内皮细胞的分化及功能

苏位君1, 王宝玉2，宋祥和3，王丽娜4，刘艳华4，周曼倩4，童玲玲5, 李宗金5

1南开大学医学院病理学系，天津 300071
2南开大学人民医院内分泌科，天津 3001213山东省日照市中医院心内科，山东日照 2768004南开大学医学院免疫学系，天津 3000715南开大学医学院病理生理学系，天津 300071

目的建立一种改良的三维分化无血清方法，对人胚胎干细胞(hESCs)向内皮细胞进行分化，并对这种方法得到的人胚胎干细胞来源内皮细胞(hESC-ECs)进行功能检测。方法在低附着培养皿中培养未分化的H9 hESCs 12 d，使其形成类胚体(EBs)，12 d后将已形成的EBs收集起来，用浓度为1.5 mg/ml的Ⅰ型鼠尾胶原重悬，加入六孔板中，在37℃待胶原凝固后加入EGM-2培养基培养3 d，获得出芽类胚体后用0.25%胶原酶Ⅰ和0.56 U/ml Liberase Blendzyme消化芽生类胚体各20 min，采用流式技术分选出其中CD31阳性的细胞，并用乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)摄取实验和成管实验验证这部分细胞的内皮细胞功能。结果建立了一种基于胶原培养环境的三维分化方法，采用这种方法能够将hESCs向内皮细胞分化的效率提高到18%，最终获得的hESC-ECs具有和人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)相似的细胞表面标志物，并在乙酰化LDL吞噬实验和血管新生实验中表现出良好的内皮细胞功能。……