苏 沐,张全安

(江苏省南京市第二医院肿瘤二科,江苏南京,210003)

肿瘤细胞中存在一群生长、转移和复发特点与干细胞基本特性十分相似的细胞,这些细胞被称为肿瘤干细胞或肿瘤起源细胞,具有自我更新和无限增殖的能力,对肿瘤的存活、增殖、转移及复发有着重要作用[1-3]。在研究脑胶质瘤肿瘤干细胞的过程中,有学者[4]发现,人脑胶质瘤细胞能在无血清培养基中形成细胞球,这种细胞球由于富集肿瘤干细胞而被称之为肿瘤干细胞球,这种富集肿瘤干细胞的方法之后被广泛用于其他实体瘤肿瘤干细胞的研究中。这一类为数极少的细胞群数量极少,但却能瘤性克隆生长,被认为是治疗后复发的重要原因之一。因此,研究肿瘤干细胞有利于进一步了解肿瘤复发、转移及耐药机制,为更合理的制定治疗方案奠定基础。结肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,约有40%～50%的患者因为复发需要行放疗或/和化疗,因此研究结肠癌肿瘤干细胞可一定程度上为临床针对性用药提供依据,具有现实意义。

1 材料与方法

1.1 材料

无血清培养基(SFM)为不含牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基,并在其中加入重组表皮生长因子(EGF)(20 μg/L,PeproTech)、碱性成纤维生长因子(bFGF)20 μg/L(PeproTech公司)、白血病抑制因子(LIF)20 μg/L(PeproTech 公司)、L-谷氨酰胺 2 mmol/L(Sigma公司)、尼克酰胺10 mmol/L(Sigma公司)、羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)5 mmol/L、青霉素G 105 U/L和链霉素100 mg/L。其他试剂及仪器包括:四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Hoechst33342(Sigma公司)、Trizol裂解液、Musashi-1及CD133抗体(B&D 公司)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒(TaKaRa公司)、光学显微镜、CO2恒温箱细胞培养、生物超净工作台、酶标仪、流式细胞分析(FCM)仪,聚合酶链反应(PCR)仪。……