芥子气诱导真皮成纤维细胞分泌肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的时效和量效研究
2012-11-06杨积顺徐立平胡晋红
杨积顺,徐立平,胡晋红
(1.中国人民解放军第100医院药械科,江苏 苏州 215007;2.第二军医大学上海长海医院药学部,上海 200433)
银屑病是一种T细胞引发并维持的自身免疫性疾病[1],患者机体免疫系统紊乱,健康细胞受到攻击,导致临床上出现各种形态的皮肤红斑鳞屑性炎症病变。银屑病患者全层皮肤均存在异常,真皮成纤维细胞在银屑病发展中扮演了重要的调节作用[2]。芥子气(sulfur mustard,SM)的化学名为“二氯二乙硫醚”,对皮肤有较强的渗透性。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的胞外区与肿瘤坏死因子(TNF)和Fas蛋白的配体(FasL)有较高的同源性,属于肿瘤坏死因子超家族的新型凋亡分子,通过与靶细胞表面的受体结合而发挥生理作用。TRAIL的主要功能是参与变异细胞的凋亡,而对正常细胞没有损伤。临床经验证明,芥子气软膏对银屑病症状和机体炎性状态的改善发挥了重要作用,但其治疗机制尚不明确。本研究中探讨了芥子气对真皮成纤维细胞分泌TRAIL的影响,旨在为研究芥子气治疗银屑病的机制提供参考。
1 仪器、试药与方法
1.1 仪器、试药
单道数字可调微量移液器(日本Nichiryo公司);ELX-800型酶标仪(美国Bio-Tek instruments Inc)。血细胞计数板(上海医用光学仪器厂);细胞培养板、培养瓶、培养皿(Corning-Costar CO.,Becton Dickinson Labware)。胶原酶(CLS-1,Worthington Biochemical Corp.);分散酶,四甲基偶氮唑盐(MTT),胰蛋白酶(tissue culture grade)均为 AMRESCO公司产品;小牛血清(GIBCO);DMEM细胞培养基(high glucose,GIBCO/BRL);二甲基亚砜(DMSO,中国医药集团上海化学试剂公司);青霉素(80万U),链霉素(1g),均为华北制药股份有限公司产品。Human TRAIL ELISA Kit(Bender Medsystems GmbH)。芥子气 (SM,第二军医大学防化教研室),密度1.27 g/mL,纯度96%,液态;加入10 mL DMEM细胞培养基溶解,得浓度为500μmol/L的贮备液,使用时以DMEM细胞培养基稀释至规定浓度,现配现用。……
