廉少杰，张伟国

(江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡214122)

梯度温度法提高L-赖氨酸发酵水平的研究

廉少杰，张伟国*

(江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡214122)

对黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)XQ90发酵生产赖氨酸的条件进行了研究。结果表明:两阶段温度控制策略(0～18h 31℃，18h～结束34℃)更有利于提高产量和发酵强度;在控温的基础上发酵周期缩短至60h;同时通过连续流加葡萄糖和硫酸铵确定了最佳残糖维持浓度5～10g/L和最佳氨氮浓度1.0～2.0g/L;在最优条件下，赖氨酸盐酸盐的产量从111g/L提高到151g/L，糖酸转化率达50.2%。

黄色短杆菌，温度控制，流加发酵，残糖，氨氮

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)XQ90 江南大学生物工程学院代谢调控与代谢工程研究室保藏菌种;完全培养基(g/L) 葡萄糖5、牛肉膏10、蛋白胨10、酵母膏5、NaCl 5、琼脂20;种子培养基(g/L)葡萄糖25、(NH4)2SO42、KH2PO420、MgSO4· 7H2O 0.4、玉米浆35、碳酸钙40;发酵培养基(g/L)葡萄糖80、(NH4)2SO48、KH2PO420、MgSO4.7H2O 0.8、MnSO4·4H2O 0.02、FeSO4·7H2O 0.02、VB110、VH50、玉米浆10、糖蜜12;以上培养基均以20% NaOH调pH至7.8，完全培养基和种子培养基121℃灭菌20min，发酵培养基115℃灭菌10min。

SBA－40C生物传感分析仪 山东省科学院生物研究所;立式圆形压力蒸汽灭菌器 上海医用核子仪器有限公司;往复式摇床 无锡查桥轻机厂; UV－2100可见紫外分光光度计 上海尤尼克有限公司;超净工作台 苏净集团安泰公司;PHS－3C型精密pH计 上海雷磁仪器厂;5L发酵罐 高百特发酵机(上海)有限公司。

1.2 培养方法

1.2.1 种子培养 500mL三角瓶中装液量80mL，置于往复式摇床上90r/min，31℃振荡培养16h。

1.2.2 5L发酵罐发酵 发酵罐中装液量2L，流加浓氨水控制pH7.0～7.2，通过流加泡敌消泡，发酵过程中流加800g/L的糖溶液和500g/L的(NH4)2SO4，控制发酵罐体积2.5L左右，中间过程进行连续放料，进多少、排多少。……