朱 婧，王青艳，，刘演景，申乃坤，陈桂光，梁智群，*

(1.广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心，广西南宁530007; 2.广西大学生命科学与技术学院，广西南宁530005)

响应面法分析优化米曲霉产β-葡萄糖苷酶液体发酵培养基

朱 婧1，王青艳1，2，刘演景2，申乃坤1，陈桂光2，梁智群2，*

(1.广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心，广西南宁530007; 2.广西大学生命科学与技术学院，广西南宁530005)

利用快速有效的响应面分析法对米曲霉ASPE0485产β－葡萄糖苷酶的发酵培养基进行优化，利用Plackett－Burman显著因子实验和Box－Behnken响应面分析优化了β－葡萄糖苷酶产生菌的发酵培养基，确定摇瓶发酵的最佳培养基组成为(%，w/v):玉米芯3.8%、大豆蛋白胨0.5%、KH2PO40.5%、MgSO4·7H2O 0.05%、CaCl20.05%、吐温－80 0.27%和接种量5.3%;在此条件下发酵，得到酶活为21.1U/mL比原始酶活(17.65U/mL)提高了19.55%。

米曲霉，β－葡萄糖苷酶，响应面分析法

1 材料与方法

1.1 实验材料

米曲霉ASPE0485(Aspergillus oryzae ASPE0485)广西大学生命科学与技术学院食品与发酵工程研究所筛选并保藏;斜面培养基 10%(w/v)麸皮水煮30min，4层纱布过滤，滤液中添加2%葡萄糖，2%琼脂，pH自然;种子培养基 50mL Mandels［4］微量元素盐溶液中加入1%(W/V)植物蛋白胨，pH自然［5］;基础摇瓶培养基 3%(W/V)玉米芯，0.2%(W/V)植物蛋白胨，0.4%(W/V)KH2PO4，0.04%(W/V)CaCl2，0.04%(W/V)MgSO4，pH自然，定容至50mL［4］。

表2 PB设计及其实验结果Table 2 Experimental design and results of the PB

表3 PB设计的回归分析结果Table 3 Results of the PB regression analysis

1.2 实验方法

1.2.1 培养方法 种子液培养方法:250mL三角瓶装液量50mL，每瓶种子培养基的接种量为1×106个孢子，培养温度为28℃，摇床转速为160r/min，培养时间为12h。

发酵培养方法:250mL三角瓶装液量50mL，种子液以2%(V/V)的接种量接入发酵培养基，培养温度为28℃，摇床转速为160r/min，培养时间为4d。

1.2.2 酶活力的测定

1.2.2.1 酶活力……