李宝坤，田丰伟，刘小鸣，赵建新，张 灏，宋元达，陈 卫，*

(1.江南大学食品学院，食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡214122; 2.石河子大学食品学院，新疆石河子832000)

冷胁迫对冷冻干燥罗伊氏乳酸杆菌细胞膜流动性的影响

李宝坤1，2，田丰伟1，刘小鸣1，赵建新1，张 灏1，宋元达1，陈 卫1，*

(1.江南大学食品学院，食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡214122; 2.石河子大学食品学院，新疆石河子832000)

以DPH(1，6－二苯基－1，3，5－己三烯)为荧光探剂，优化了测定罗伊氏乳酸杆菌细胞膜流动性的条件，其最佳测定条件为:激发波长360nm，发射波长430nm，菌浓度OD 0.8，30℃孵育时间为20min。同时研究冷胁迫处理对冷冻干燥存活率。细胞活力及细胞膜流动的影响，研究表明冷胁迫能改善乳酸菌的冷冻干燥存活率，同时在一定的条件下，冻干后细胞的流动性也有所改变，说明经过一定的冷胁迫处理后，增加了细胞的抗性，从而提高细胞的冷冻存活率。

冷胁迫，罗伊氏乳酸杆菌，DPH，细胞膜流动性，冷冻干燥

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

罗伊氏乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri) 本实验室保存;培养基 MRS;1，6－二苯基－1，3，5－己三烯DPH，Aldrich公司;四氢呋喃、其他试剂 均为分析纯。

650－60荧光分光光度计 日本，日立有限公司;冷冻干燥机 美国，LABCONCO有限公司;2450紫外－可见光分光光度计 岛津国际贸易(上海)有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 胁迫处理 菌体培养18h(稳定前期)后，经过离心浓缩，加入15%蔗糖(w/v)作为保护剂，分装为9份，其中1份立即在－80℃预冻，其余分别放在4℃与10℃进行冷胁迫处理，经过1、2、3、4h处理后，放入－80℃预冻后进行冷冻干燥

1.2.2 冻干存活率计算 将冻干后的菌粉用PBS复水至冻干前相同体积，采用MRS倒平板法，37℃下培养48h，计数。……