彭莉娟，王 伟，张赛赛，赵春江，冯凤琴，*

（1.浙江大学生工食品学院，浙江杭州310058；2.浙江省农业科学院，浙江杭州310021）

基于模拟酶切的酪蛋白定向酶解探究

彭莉娟1，王 伟2，张赛赛1，赵春江1，冯凤琴1，*

（1.浙江大学生工食品学院，浙江杭州310058；2.浙江省农业科学院，浙江杭州310021）

用模拟酶切软件peptidecutter提供的39种蛋白酶，对已知序列的酪蛋白进行模拟酶切，以生成的寡肽数量为指标建立酶解肽库，选择适用酶并进行真实条件下的酶解验证，获得最适用酶；以血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽的抑制率和酪蛋白磷酸肽（CPP）的氮磷摩尔比来评价ACE抑制肽的活性及CPP的纯度，超滤分离酶解液获得高纯度的ACE抑制肽和CPP。结果表明：胰蛋白酶为最适用酶，超滤后ACE抑制肽的抑制活性及CPP的纯度显著升高（p<0.01），获得了高活性的ACE抑制肽和高纯度的CPP。

酪蛋白，模拟酶解，血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽，酪蛋白磷酸肽（CPP）

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

酪蛋白 临夏州华安生物制品有限公司；马尿酸、ACE、马尿酰组氨酰亮氨酸（HHL） sigma公司；胰蛋白酶（28万U/g） 国药集团化学试剂有限公司；中性蛋白酶（15万U/g）、碱性蛋白酶（4000U/g） 南宁庞博生物工程有限公司；乙腈 天津四友精细化学品有限公司，色谱纯；其他化学试剂均为分析纯。

LC-20AD液相色谱仪 日本岛津公司；Kjeltec2300全自动定氮仪 丹麦FOSS公司；超滤装置、膜包（PLCGC再生纤维素膜，截留分子量为1k和5k） 美国Millipore公司；PB-10 pH计、BSA224S电子分析天平 德国sartorius公司；DF101S磁力搅拌仪 中国英峪予华仪器厂；LXJ-IIB离心机 上海安亭科学仪器厂；DKS-24恒温水浴锅 中国中新医疗仪器有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 肽数据库的建立及……