林日辉，黄新林，黄文勤

（1.广西民族大学化学与生态工程学院，化学与生物转化过程新技术广西高校重点实验室，广西南宁530006；2.南宁奕德环境科技有限公司，广西南宁530003）

高产琥珀酸放线杆菌的诱变选育

林日辉1，黄新林1，黄文勤2

（1.广西民族大学化学与生态工程学院，化学与生物转化过程新技术广西高校重点实验室，广西南宁530006；2.南宁奕德环境科技有限公司，广西南宁530003）

对琥珀酸放线杆菌（Actinobacillus succinogenes mdrh-5）进行紫外-亚硝基胍复合诱变，采用变色圈、氟乙酸耐受和CuSO4快速分析结合的筛选方法，获得1株高产琥珀酸突变菌株。与野生菌相比，突变株琥珀酸产量提高了43%，副产物乙酸降低了66%，突变株遗传性质稳定。

琥珀酸，发酵，紫外-亚硝基胍复合诱变

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

琥珀酸放线杆菌（A.succinogenes mdrh-5） 本实验室从牛的瘤胃中分离保存；琥珀酸 sigma公司；亚硝基胍 北京中胜华腾科技有限公司；酵母提取物 广东环凯微生物科技有限公司；胰蛋白胨 OXOID公司；氟乙酸钠 本实验室制备；其他试剂 均为国产分析纯。

LC-20A高效液相色谱仪 日本岛津公司；Aminex HPX-87H色谱柱 美国伯乐公司；F254硅胶板 德国Merck公司；THZ-C恒温摇床，磁力搅拌器等。

1.2 实验方法

1.2.1 培养基的制备

1.2.1.1 菌种传代保藏培养基（1L） 酵母提取物3.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g，琼脂20.0g，pH7.0~7.2。

1.2.1.2 平板分离培养基（1L） 酵母提取物5.0g，蛋白胨5.0g，葡萄糖20.0g，氯化钠5.0g，琼脂20.0g，溴甲酚氯0.1g，pH7.0~7.4，添加适宜浓度氟乙酸钠。

1.2.1.3 种子培养基（1L） 胰蛋白胨10.0g，酵母提取物5.0g，氯化钠10.0g，pH7.0~7.2。

1.2.1.4 发酵培养基（1L） 葡萄糖20.0g，酵母提取物5.0g，磷酸氢二钾1.0g，氯化钠0.5g，硫酸铵1.0g，二水氯化钙0.5g，六水氯化镁0.5g，碱式碳酸镁1.3g，pH7.0~7.2。……