刘自琴，黄惠华*

(华南理工大学轻工与食品学院，广东 广州 510640)

响应面法优化脂肪酶的固定化条件及其水解橄榄油的特性研究

刘自琴，黄惠华*

(华南理工大学轻工与食品学院，广东 广州 510640)

采用Sepharose CL-4B和7种大孔树脂为载体固定Palatase 20000L脂肪酶，对载体进行筛选，以酶活力为指标，采用响应面法优化固定化条件，并考察所制得固定化酶的稳定性和水解橄榄油的酶学性质。结果表明：以大孔树脂HPD-600为载体制得的固定化酶具有较高的活性和良好的稳定性。其最优的固定化条件为：pH3.9，酶与载体比例为9.1mg/g，吸附时间1.8h。在最优条件下制得固定化酶在最适合条件下测得的酶活力达到1440U/g，酶活回收率大于50%。固定化酶最适作用温度为50℃，最适作用pH值为8.0。固定化酶的Km值为0.130g/mL，高于游离酶的Km(0.069g/mL)。固定化酶的热稳定性有一定程度的提高，其重复操作5次后相对酶活力仍保持在58%以上。

Palatase 20000L脂肪酶；固定化；稳定性；响应面法

脂肪酶(三酰基甘油酰基水解酶，EC 3.1.1.3)是使用最广泛的酶之一。广泛应用于食品、化学、油脂化学品、农业化学、造纸、洗涤和生物表面活性剂的合成及生物柴油生产等工业[1]。但是脂肪酶的工业化应用主要有两个障碍，一是成本高，二是游离脂肪酶的稳定性差。为了解决这两个障碍，众多研究者都进行了脂肪酶固定化的研究，旨在解决脂肪酶的应用难题，使其发挥更大的工业用途[2]。固定化酶具有很多游离酶不具备的优点，如运用固定化酶可以进行反复分批反应和装柱连续反应，能更好的控制产品质量；……