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间接荧光法测定水产品中L-谷胱甘肽的含量

2012-10-25潘煜辰陈舜胜赵善贞

食品工业科技 2012年20期

潘煜辰,陈舜胜,*,宋 青,赵善贞

(1.上海海洋大学,上海 201306;2.上海出入境检验检疫局,上海 200135)

间接荧光法测定水产品中L-谷胱甘肽的含量

潘煜辰1,陈舜胜1,*,宋 青2,赵善贞2

(1.上海海洋大学,上海 201306;2.上海出入境检验检疫局,上海 200135)

建立了间接荧光法测定水产品中L-谷胱甘肽(GSH)含量的方法。样品经三氯乙酸(TCA)沉淀蛋白,调上清液pH至10.5同时二次沉淀蛋白,提取液稀释一定倍数后以邻苯二甲醛(OPA)为荧光衍生剂,等体积(1∶1,v∶v)暗处混合反应1~2min,在Ex 325nm和Em 400nm条件下测得总荧光值A。同时以N-乙基马来酰亚胺(NEM)屏蔽待测液中含巯基的化合物,测得杂质产生的荧光值B,以总荧光值A减去荧光值B,得出GSH所产生的荧光值,间接测得GSH含量。在0.125~1.250mg/L浓度范围内GSH线性关系良好,R2=0.9963,回归方程为Y=57.012X。该方法的相对标准偏差(RSD)为3.83%~5.25%,平均回收率为91.37%~102.20%。改进后的方法弥补了荧光法本身特异性不高的缺点,使得测定更精确,适用于水产品中L-谷胱甘肽含量的测定。

L-谷胱甘肽,间接荧光校正法,牡蛎,蚝油

L-谷胱甘肽(GSH),又称还原型谷胱甘肽,是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸通过肽键缩合而成的三肽化合物,是一种用途广泛的活性短肽,广泛存在于动植物中,在酵母、胚芽和动物肝脏中的含量极高[1]。目前,L-谷胱甘肽的主要检测方法[2-3]有酶循环法、电化学法、荧光法和高效液相色谱法(HPLC)等。其中,酶循环法[4]虽然廉价,但如果待测体系中存在氧化型谷胱甘肽(GSSG),则该方法测得的是总谷胱甘肽的量,无法单独测定GSH的含量;电化学法[5-6]的灵敏度很高,是唯一一种不需要对GSH进行衍生化就可测得其含量的方法,但是很多电极在长时间使用后,其表面被氧化,稳定性和灵敏度都会下降,而且多数电极的价格相当昂贵;……

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