王庆辉，冯永辉，刘 军，李 莹，曹雅明，吕昌龙

(1.中国医科大学基础医学院免疫学教研室，辽宁 沈阳 110001;2.沈阳市胸科医院检验科，辽宁 沈阳 110044)

接触性超敏反应(Contact hypersensitivity，CHS)是用来研究人类过敏性接触性皮炎(Allergic contact dermatitis，ACD)免疫机制的实验动物模型，同时，也是研究体内免疫活化和调节的重要模型之一。而且，很大程度上用此模型研究免疫机制比研究ACD疾病本身更加宽泛［1］。CHS是由于接触低分子量半抗原而引发的皮肤炎症性改变，属于一种T细胞介导的迟发型超敏反应，即Ⅳ型超敏反应。近年来，研究表明分泌IL-17的CD4+Th(Th17)细胞亚群在CHS发展过程中也发挥重要作用［2-3］。虽然大多数人在每天的生活中都会不断地接触潜在的致敏物质，但最终并不发展成CHS;而且就是在过敏的个体，过敏反应的程度也是随时间而波动的，并且可以自愈。这些观察结果表明，机体对化学物质导致的接触过敏具有精细而复杂的调节机制［4］。CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞(Treg)是近年来发现的具有较强免疫调控作用的T细胞亚群，在诱导和维持免疫耐受及终止免疫反应的过程中发挥中心作用。Treg与效应T细胞之间必须保持平衡以维持足量而适当的免疫反应。为此，本实验利用抗-CD25 mAb 7D4在小鼠体内消除Treg，以研究内源性Treg对CHS过程的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 6～8周龄，雌性，C57BL/6小鼠(本校实验动物部提供)。

1.1.2 主要试剂 氯化苦咪酸(Trinitrochlorobenzene，TNCB)(Sigma);抗-CD4-FITCmAb(GK1.5)、抗-CD25-PE mAb(PC61)、抗-IL-17-Alexa Flour®647 mAb(TC11-18H10)、细胞因子固定透膜剂和FcγIII/II封闭抗体(2.4G2)均购自美国BD公司;抗-Foxp3-APC mAb(FJK-16S)和FoxP3胞内染色试剂盒，购自美国eBioscience公司。抗-CD25 mAb(clone 7D4)由本实验室制备。

1.1.3 主要仪器 FACSCalibur流式细胞仪(Becton-Dickinson);CO2孵箱(Harasawa，Japan);千分尺(Mitutoyo)。……