剧慧栋，李月颖，张乐祎，李秀娟，赵宝华，徐保红*

(1.石家庄市疾病预防控制中心，河北 石家庄 050011;2.河北师范大学，河北 石家庄 050024)

奶牛乳房炎是奶牛的一种多发病和常见病，是由多种致病微生物引起的局部病变，对奶牛养殖业造成了巨大损失。据统计，能引起奶牛乳房炎的微生物主要是细菌，以无乳链球菌(Streptoco-ccus agalactiae)、停乳链球菌(S.dysgalactiae)、沙门菌(Salmonella sp.)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染居多［1-2］。PCR-焦磷酸测序技术是近几年发明的一种实时DNA序列分析技术，以快速、准确、实时分析DNA序列见长，使用该技术可以在很短的时间内，得到大通量的待测菌的基因序列，从而鉴定出引起奶牛乳房炎的致病菌种类［3-4］。本文采用生物信息学分析技术确定了无乳链球菌、停乳链球菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的具有相对保守区域的特异性基因，对所选基因进行了序列比对和分析，以使所获的基因更具有代表性，避免或减少假阳性和假阴性结果的产生。为了验证PCR-焦磷酸测序方法的准确性，选取了大量的目的菌株和参照菌株进行了重复性验证，结果表明应用PCR-焦磷酸测序方法对上述奶牛乳房炎4种主要致病菌的检测准确率非常高，没有出现一例漏检和误检。因此，该方法的建立为奶牛乳房炎致病菌的检验工作提供了一种新的更加准确、快速的检验手段［5-8］。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 无乳链球菌108株，停乳链球菌类马亚种100株，沙门氏菌136株，金黄色葡萄球菌203株，乳房链球菌(Streptococcus agalactiae)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、肠侵袭大肠埃希……