张 鹏，李 莉，王智学，王 萍，李晓旭，柴林山，孙丽梅

(1.沈阳农业大学土地与环境学院，辽宁 沈阳 110861;2.辽宁省微生物科学研究院，辽宁 朝阳 122000)

灰霉病已经导致世界范围内200多种农作物严重减产，危害对象从葡萄、番茄、草莓等浆果到蔬菜及果核类作物［1］。随着现代农业设施的改进，我国番茄种植规模不断扩大，提高了灰霉病发生发生的几率。番茄灰霉病是由灰葡萄孢菌引起的重要植物病害，是我国重点防治的蔬菜病害之一。目前对灰霉病的防治主要以化学药剂为主，长期施用不但使灰葡萄孢菌产生一定的抗药性，而且由此带来的农药残留及环境污染问题日趋严重。利用拮抗微生物防治植物病害是具有发展潜力的防治方法，一些细菌和真菌相继被应用于生物农药的生产，如枯草芽胞杆菌、多粘芽胞杆菌及哈茨木霉等［2］，国内外许多学者已经进行了灰霉病生物防治研究工作，并取得了一定的进展。本实验室选用辽宁省朝阳地区番茄大棚根际土壤和发病植株样本进行生防菌株的分离、筛选，旨在为生物农药的研发提供实验材料。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 来自辽宁省朝阳县、喀左、北票不同地区番茄大棚根际土壤和发病植株。所用植物病原真菌番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)由辽宁省微生物科学研究院提供。

1.1.2 培养基 PDA培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、KB培养基，液体培养基不加琼脂。

1.1.3 主要仪器和试剂 高速冷冻离心机(Sigma 3K15型)、PCR仪(Systerm2700)、紫外可见分光光度计等，PCR反应需要的试剂(分析纯)均购于TaKaRa公司。……