王美莲，刘 兵，史俊岩，郑兰艳，罗恩杰

(中国医科大学病原生物学教研室，辽宁 沈阳 110001)

汉坦病毒(hantaan virus，HV)属于布尼亚病毒科汉坦病毒属，由其引起的人类肾综合症出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS)是一类以发热、出血和肾功能损伤为特征的急性传染病，病死率达0.1% ～10%［1］。病毒不仅可以直接引起全身小血管和毛细血管损伤、血管通透性增加和微循环障碍，还可引起免疫应答异常，进而引发高热、出血及肾损害等临床症状。汉坦病毒主要编码基因由S、L、M 3条单链负股RNA组成，它们分别编码汉坦病毒核蛋白、RNA聚合酶、糖蛋白，而含M基因的重组体DNA可诱导产生中和抗体，并且对病毒株的攻击有保护力。目前研究者已经对核蛋白的作用作了较深入的研究［2-3］。但对糖蛋白的研究相对较少。汉坦病毒M2基因上含有较多的抗原决定簇，因此如果可以大量的人工合成并提取G2蛋白对汉坦病毒糖蛋白单克隆抗体的研究及应用有重要的意义。本实验以原核表达质粒pGEX-6P-1为载体，构建了含有汉坦病毒76-118株编码囊膜糖蛋白G2抗原基因片段的原核表达载体pGEX-6P-1-M2，通过研究其在原核细胞中的表达，探讨汉坦病毒糖蛋白在筛选单克隆抗体及研制试剂盒中的应用前景。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株与质粒 原核表达载体pGEX-6P-1、汉坦病毒76-118 株 M 片段、E.coli DH5α、E.coli BL21为本教研室保存。

1.1.2 引物的设计与合成 引物参照GenBank设计，由沈阳博奥春天生物公司设计并合成。序列如下:上游引物:5'-CGTGTTACCGGACACTAA-3'，BamHⅠ酶切位点;下游引物:5'-CCGAGTCACAGAATTTAGC-3'，XhoⅠ 酶 切位点。

1.1.3 主要试剂 限制性内切酶 EcoRⅠ及T4DNA连接酶、DL 15000 DNA Marker、小量 DNA纯化试剂盒、DNA凝胶回收试剂盒、预染蛋白Marker购自大连TaKaRa公司;辣根过氧化物酶标记羊抗人抗体、琼脂糖购自BIOWEST公司。……