阎雪梅，陈 涛

(天津中医药大学第一附属医院，天津 300193)

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters高效液相色谱仪∶waters600型HPLC泵，2998二极管阵列检测器(DAD)，Empower色谱工作站，A1104型分析天平(上海分析仪器厂)。

1.2 试药 丹酚酸B(中国药品生物制品检定所，批号111562－200504)，乙腈、甲酸，冰乙酸均为色谱纯，甲醇、乙醚、正丁醇、氨水均为分析纯，超纯水(自制)。丹芪偏瘫胶囊(天津市石天药业有限责任公司，批号dq2008045、dq2008046、dq2008047)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验［1－3］色谱柱:WatersSunfireTM C18(250 mm ×4.6 mm，5.0 μm)，流动相:乙腈－水－冰乙酸(30∶70∶1.2)，检测波长:286 nm;流速:1.0 ml/min;柱温:35 ℃;进样量:20 μl;理论版数按丹酚酸B计应不低于2 500。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液制备 精密称取丹酚酸B对照品，用适量甲醇溶解，并定容至25 ml，摇匀，制成每1 ml含0.496 mg的丹酚酸B对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液制备 取丹芪偏瘫胶囊内容物1.6 g，精密称定，置具塞三角瓶中，加入甲醇 40 ml，加热回流1 h，提取液回收溶剂至干，残渣加水40 ml，用稀盐酸调节pH至3，静置1 h后，用醋酸乙酯提取4次，每次25 ml，醋酸乙酯提取液水浴蒸干，残渣用适量甲醇溶解，定容至5 ml，摇匀，滤过，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按丹芪偏瘫胶囊处方比例及工艺，制备成缺丹参的阴性浓缩液，再按照“2.2.2”项下方法制成缺丹参的阴性对照品溶液。

2.3 空白试验 在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图(见图1)。供试品色谱图中，在与对照品色谱峰相应保留时间处，有相同色谱峰，而阴性对照在此保留时间处无干扰。并且丹酚酸B色谱峰与相邻色谱峰分离度符合要求，表明处方中其他组分对丹酚酸B含量测定无干扰。

图1 对照品(A)供试品(B)阴性对照(C)HPLC色谱图

2.4 线性关系 精密吸取 0.2、1.0、1.5、2.0 和 4.0 ml的对照品溶液，分别置于5 ml棕色量瓶中用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别配制成 0.019 84、0.099 2、0.148 8、0.198 4 和0.396 8 mg/ml系列浓度的对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样20 μl。进样后，记录峰面积，以浓度X与峰面积Y进行线性回归，得回归方程为 Y=2.24 X －2.22(r=0.999 7)，表明丹酚酸B在0.019 84～0.396 8 mg/ml范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 取浓度为0.148 8 mg/ml的对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样20μl，连续测定6次，记录峰面积，RSD为 1.27%，结果表明精密度良好。

2.6 重现性试验 取丹芪偏瘫胶囊(dq2008045)，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别进样 20 μl，记录峰面积，RSD为1.48%，结果表明重现性良好。

2.7 稳定性试验 取丹芪偏瘫胶囊(dq2008045)，按“2.2.2”项下制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件于 0、2、4、8、12 和 24 h 时分别进样 20 μl，进行含量测定，RSD为1.58%，表明供试品溶液在24 h内稳定。2.8 加样回收率试验 精密称取丹酚酸B对照品10.98 mg，置于10 ml量瓶中，用醋酸乙酯超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，备用。称取已知含量的供试品(dq2008045，含量为 1.372 2 mg/g)6 份，每份 0.8 g，分别加入丹酚酸 B 对照品溶液1 ml，按“2.2.2”项下方法处理样品，测定样品并计算回收率，结果平均回收率为97.16%，RSD 为1.88%，见表1。

2.9 成品含量测定 取丹芪偏瘫胶囊按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，均以20μl进样，测定丹酚酸B含量。结果，3批样品(dq20087045、dq2008046和dq2008047)中丹酚酸 B的含量分别为 1.372 2、1.355 8和 1.345 0 mg/g。

表1 丹酚酸B加样回收率试验结果(n=6)

3 讨论

3.1 流动相的选择 一般测定丹酚酸B的流动相系统为甲醇－乙腈－甲酸－水系统，因此以不同比例的甲醇－水、甲醇－酸水和乙腈－酸水为流动相进行比较试验，考察对本品的分离效果，结果表明，本方法中乙腈－水－冰乙酸系统(30∶70∶1.2)为流动相时，丹酚酸B的分离效果较佳，色谱峰峰形较好，与相邻组分均能达到基线分离。

3.2 丹芪偏瘫胶囊提取的考查 丹芪偏瘫胶囊中所含成分复杂，直接提取进样所得谱图峰多且分离度不好，故采用先提取后萃取的方法。丹酚酸B为酸性有效成分，因此考虑调节酸性以利于丹酚酸B的提取。经检测，用8%盐酸溶液调节pH值分别为2、3、4和5，进行提取进样。经比较，当pH为2时，丹酚酸B的含量较高，但是前面杂质峰较高，因此确定pH为3。

1 房海燕，林桂涛，李 涛.HPLC法测定冠心丹参片中丹酚酸B的含量.山西轻工业学院学报，2006，20(2):70

2 朱山寅，傅素华.HPLC法测定心可宁胶囊中丹酚酸B的含量.中华中医药学刊，2007，25(4):810

3 李晓红，冯玛莉，刘霞.高效液相色谱法测定丹芪养血颗粒中丹酚酸B 的含量.中南药学，2008，6(6):557