张勤英，朱 凡，王毓明

(南京医科大学附属苏州医院、苏州市立医院北区肿瘤内科，江苏苏州215008)

近年来，有较强免疫抑制功能的CD4+T细胞亚群受到广泛关注。调节性T细胞 (regulatory T cell，Treg)作为一群具有免疫抑制效应的T细胞亚群，在维持机体自身耐受和抑制自身免疫疾病发生发展中具有重要作用，其中CD4+CD25highTreg等与肿瘤免疫逃逸有密切关系。本研究应用流式细胞仪测定了36例结直肠癌患者及30名健康对照者外周血中CD4+CD25highTreg及其表面功能性标志分子细胞毒T淋巴细胞相关抗原 －4(cytotoxic T lymphocyte antigen-4，CTLA-4)和叉状头/翅膀状螺旋转录因子(transcription factor forkhead box P3 protein，FoxP3)，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择2010年1月至2011年6月在我科住院接受治疗的结直肠癌患者36例，男性20例，女性16例;年龄46～73岁，平均年龄(56.6±10.2)岁。所有患者均经手术及术后病理确诊，近1个月未接受抗肿瘤治疗，近2个月未使用过免疫调节剂，无近期感染病史和自身免疫性疾病史。健康对照组为我院体检中心提供的年龄、性别具有可比性的30例体检健康者，男性17例，女性13例;年龄36～68岁，平均年龄(52.2 ±12.3)岁。

1.2 主要试剂 藻红蛋白(PE)结合的CD4-PE单抗和异硫氰酸荧光素(FITC)标记的CD25-FITC单抗购自美国BD公司;叶绿素蛋白复合物(PerCP)结合的CTLA-4 PerCP、藻青蛋白标记(APC)FoxP3单抗及配套染色试剂均购自美国eBioscience公司;阴性对照采用的IgG2a-FITC、IgG1-PE和IgG-PerCP购自美国BD公司。

1.3 检测方法 采集3 mL肘静脉血，EDTA抗凝，以淋巴细胞分离液获得单个核细胞，计数，调整细胞悬液浓度为 1 × 107mL－1，取样 100 μL，分别加入 10 μL CD25、10 μL CD4、5 μL CTLA-4 和 10 μL FoxP3 抗体，室温下避光10 min，加溶血素2 mL后再避光10～15 min，根据红细胞裂解状态，以1 500 r·min－1离心5 min，弃上清液，加PBS液洗涤1次，再加200～500 μL PBS液混匀，上流式细胞仪检测。……