刘静 王斌斌 刘斐叶 左强

（南方医科大学南方医院肿瘤中心，广东 广州 510515）

表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）基因定位于染色体7p12[1]。EGFR在人类部分肿瘤中呈高表达，其介导的信号传导与肿瘤发生、发展及预后密切相关。鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）中EGFR高表达，并且这种高表达与不良预后相关[2]。西妥昔单抗（cetuximab）是一种人／鼠嵌合型IgG单克隆抗体，可与细胞表面EGFR特异性结合，竞争性阻断表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）和其他配体如转化生长因子－α（transforming growth factor-α，TGF-α）的结合，从而阻断EGFR依赖的肿瘤细胞增殖、转移、侵袭以及血管生成等生物学效应。本研究应用蛋白质印迹法检测人NPC细胞株CNE-1、CNE-2、HONE-1、C-666、SUNE-1、5-8F 以 及HNE-17种细胞株中EGFR蛋白表达水平，用MTT法检测西妥昔单抗对细胞株的抑制率，并探讨两者的相关性，了解检测EGFR蛋白表达水平是否能够判断西妥昔单抗治疗NPC的疗效。

1 资料与方法

1.1 研究材料 西妥昔单抗由德国Merck公司提供，β-actin一抗与EGFR一抗购自武汉Boster公司，人NPC细胞株CNE-1、CNE-2、HONE-1、C-666、SUNE-1、5-8F以及 HNE-1由广州博川生物科技有限公司提供。采用RPMI 1640培养液。

1.2 蛋白质印迹法检测EGFR蛋白表达水平 按常规方法进行。

1.3 MTT法检测细胞抑制率 按常规方法进行。用Bio-Tek酶标仪分析490 nm处OD值。细胞抑制率＝（加药组OD值－空白对照组OD值）／（正常对照组OD值－空白对照组OD值）×100%

1.4 统计学处理 用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析。采用方差分析和双变量相关分析，检验水准α＝0.05。

2 结 果

2.1 不同NPC细胞株中EGFR蛋白的表达差异不同NPC细胞株的EGFR表达水平有显著差异（F＝1748.784，P＜0.001），其中以5-8F细胞株中EGFR表达水平最高，显著高于其他6种细胞株（P＜0.001）；其次为SUNE-1，见图1～2。

图1 不同NPC细胞株EGFR蛋白表达

图2 不同NPC细胞株EGFR蛋白表达水平

2.2 西妥昔单抗对不同NPC细胞的抑制率 1500 μg／mL浓度时，西妥昔单抗对不同NPC细胞株的抑制率差异有统计学意义（F＝5.942，P＝0.003），其中以对5-8F细胞株的抑制率最高，对 HONE-1抑制率最低；1800μg／mL浓度时，西妥昔单抗对不同NPC细胞的抑制率无显著差异（F＝2.565，P＝0.069），其中以对CNE-1细胞抑制率最高。西妥昔单抗高浓度组中NPC细胞的抑制率虽均高于低浓度组，但两组之间无显著差异（P＞0.05）。见表1、图3。

表1 西妥昔单抗不同浓度时对不同NPC细胞株的抑制率（）

表1 西妥昔单抗不同浓度时对不同NPC细胞株的抑制率（）

细胞株类型 西妥昔单抗（1500μg／mL） 西妥昔单抗（1800μg／mL） F值 P值288 CNE-2 43.90±15.06 56.16±20.16 0.356 0.583 HNE-1 41.45±5.13 68.33±3.39 1.132 0.3475-8F 47.88±3.57 51.56±4.84 0.132 0.735 HONE-1 15.27±7.31 66.81±2.80 1.490 0.289 C666 43.67±2.23 55.48±2.94 0.587 0.486 SUNE-1 45.01±1.52 64.96±1.62 0.023 0.888 F 值 5.942 2.565 P值 0.003 0.CNE-1 40.71±10.16 72.39±6.15 1.498 0.069

图3 西妥昔单抗不同浓度时对不同NPC细胞株的抑制率

2.3 EGFR表达水平与细胞抑制率相关性研究1500μg／mL浓度时，西妥昔单抗的细胞抑制率与EGFR蛋白表达水平呈显著正相关（r＝0.444，P＝0.044）；1800μg／mL浓度时西妥昔单抗的细胞抑制率与EGFR蛋白表达水平则呈显著负相关（r＝-0.468，P＝0.032）。

3 讨 论

西妥昔单抗治疗EGFR高表达的转移性结直肠癌、局部晚期及复发／转移头颈部鳞癌（SCCHN），疗效好[3－4]。最近，研究者们认为，表达野生型 K-ras基因的结直肠癌患者采用西妥昔单抗和化疗联合治疗疗效较好，而K-ras基因为突变型的患者在化疗基础上应用西妥昔单抗并无额外益处。

NPC是我国最常见的头颈部恶性肿瘤，好发于中国南方各省及东南亚地区，其病因包括EB病毒、遗传易感性、多种癌基因和抑癌基因的相互作用以及环境和饮食因素[5－6]。NPC的 EGFR 表达率为90%～100%。Ma等[7]报告，EGFR表达与未分化NPC患者的不良预后相关，提示EGFR表达可作为判断NPC患者预后的一个指标。K-ras癌基因被认为是细胞恶变过程中起引发作用的基因，在NPC发生和发展中K-ras基因过表达起重要作用，而非基因突变[8]。故无法通过检测K-ras基因状态来决定是否应用西妥昔单抗。目前研究尚未证实EGFR基因或蛋白检测可预测EGFR抑制剂的疗效。

本研究显示，不同NPC细胞株均存在EGFR蛋白表达，其中以5-8F最高，CNE-1最低；西妥昔单抗对不同NPC细胞株生长均有一定程度抑制作用，其中1500μg／mL浓度对5-8F抑制率最高；1800 μg／mL浓度对CNE-1抑制率最高，而对5-8F抑制率最低。通过对EGFR蛋白表达水平与细胞抑制率之间的相关性研究发现，当西妥昔单抗浓度为1500μg／mL时，两者之间呈显著正相关（r＝0.444，P＝0.044），但当浓度增加至1800μg／mL，两者之间呈显著负相关（r＝-0.468，P＝0.032）。这一结果提示，NPC细胞中EGFR蛋白表达水平与西妥昔单抗细胞抑制率之间并无相关性，在NPC治疗选择过程中，EGFR蛋白表达水平并不能作为预测西妥昔单抗疗效的指标。

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[8]Coutinho CM，Bassini AS，Gutiérrez LG，et al.Genetic alterations in Ki-ras and Ha-ras genes in juvenile nasopharyngeal angiofibromas and head and neck cancer[J].Sao Paulo Med J，1999 ，117（3）：113-120.