郑艳丽，孙天敏，王 萌，李瑞花，姚柏春，谭华炳

阿尔茨海默病（A1zheimer’s disease，AD）主要病理特征是大脑皮质、海马、嗅球、基底前脑神经元丧失、神经突触减少，细胞外存在大量由β－淀粉样蛋白（β－amyloid，Aβ）组成的老年斑（senile plaques，SP）、神经细胞内神经纤维丝缠结（neurofibrillary tangles，NFTs）。关于AD的发病机制尚无定论。目前临床治疗AD的药物只能缓解某些症状如改善AD患者学习记忆功能，既无有效方法缓解病情进展，也无法补充大脑皮层、基底前脑和海马大量丢失的神经元、神经突触和神经递质［1，2］。近几年研究表明，绞股蓝皂甙（stevenleafs，SLs）具有抗衰老、增强机体免疫以及显著的抗氧化与神经保护功能［3］，但SLs对AD治疗作用的研究报道很少［4］。本实验首先原代培养胎鼠基底前脑胆碱能神经元，应用 MTT［3－（4，5－Dimethylthiazol－2－yl）－2，5－diphenyltetrazolium bromide］比色试验检测SLs对细胞活性的影响。然后采用大鼠β淀粉样蛋白1－40（rat amyloid beta peptide 1－40，Aβ1－40）诱导胆碱能神经元损伤，在体外建立 AD细胞模型。运用免疫细胞化学染色和流式细胞仪分别检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达和凋亡，观察SLs对Aβ1－40诱导胆碱能神经元损伤的影响，为SLs用于临床防治AD提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 孕15d～16dSD大鼠2只，由湖北医药学院实验动物中心［许可证号：SCXK（鄂）2005－0008］提供。SLs购自上海亿欣生物科技有限公司，脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）购自美国 Promage公司。大鼠Aβ1－40、多聚赖氨酸、胰蛋白酶均购自美国Sigma公司。Annexin V－FITC／PI双染细胞凋亡检测试剂盒购自武汉天源生物科技公司，兔抗人胆碱乙酰转移酶抗体（rabbit anti－human choline acetyltransferase，ChAT Antibody）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitricoxide synthase，iNOS）一抗、SABC试剂盒、胎牛血清、DMEM购自美国Gibco公司。

1.2 方法

1.2.1 基底前脑神经元培养 孕15d～16dSD大鼠2只，无菌条件下，取胚鼠基底前脑原基，小心剥除软脑膜，用眼科剪将其剪成小碎块，并向其中加入0.25%胰蛋白酶，37℃水平摇床消化5min。……