方淑兵，王俊平，王 硕，张 燕，生 威，王 津，杨依锦

（天津科技大学食品安全管理与战略研究中心，天津300457）

重金属汞酶联免疫检测方法的建立

方淑兵，王俊平*，王 硕，张 燕，生 威，王 津，杨依锦

（天津科技大学食品安全管理与战略研究中心，天津300457）

建立了重金属汞离子的间接竞争酶联免疫（IC-ELISA）分析方法。由于汞离子不具有免疫原性，因此以异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸（ITCBE）为双功能螯合剂连接汞离子和钥孔血蓝蛋白（KLH）作为免疫原，免疫新西兰大白兔获得特异性抗体。用获得的抗体建立汞的ELISA分析方法。检测限为0.45μg/L，灵敏度为4.10μg/L。特异性实验表明，抗体对镍和铜的交叉反应率分别为10.8%和13.5%，与其他金属均无明显交叉反应。本实验以白芷、胡萝卜和皮皮虾为基质，添加回收实验表明，白芷、胡萝卜、皮皮虾回收率均在70%～120%。使用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）验证方法的准确性，仪器检测结果和建立的ELISA分析方法具有很好的相关性（相关系数为0.988），表明建立的方法具有很好的准确性。

汞，酶联免疫，多克隆抗体

Abstract：An indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay（IC-ELISA） was developed for the rapid detection of Hg（II）.As the mercury ion was not immunogenic，so mercury was linked to the keyhole limpet hemocyanin（KLH） with 1-（4-isothiocyanobenzyl） ethylenediamine-N，N，N’，N’-tetraacetic acid（ITCBE） as immunogen.For the developed ELISA，the limit of detection and sensitivity were 0.45μg/L and 4.10μg/L，respectively.The cross-reactivity against other metals were all low，except for copper and nickel，which had10.8%，13.5%corss-reactivity，respectively.The recoveries of dahurica，carrot and Pipi shrimp sample were ranging from 70%to 120%.The accuracy of the developed IC-ELISA method was validated by inductively coupled plasma mass spectrometry（ICP-MS）.The developed ELISA for dahurica sample showed high correlation with ICP-MS（the correlation coefficients were 0.988）.Thus，it was demonstrated that the established immunoassay for the detection of Hg（II） was reliable.

Key words：mercury；ELISA；polyclonal antibody

汞是自然界存在的在常温下唯一呈液态的金属元素，广泛的应用于生产和生活的各个领域。汞同时也是一种对生物具有很强毒性的金属元素，会给生态环境和农产品带来污染，对人类健康造成危害，比如甲基汞在食物链中富集，不仅毒害动物，而且影响人的肾、肺、大脑及免疫系统[1-2]。汞污染在世界的某些地区已成为大众健康的公害[3]。因此，对重金属汞的检测就显得尤为重要。目前常用的重金属检测方法主要包括紫外分光光度法（UV）[4]、原子荧光光谱（AFS）法[5]、原子吸收光谱（AAS）法[6]、电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法[7]等。……