马丽敏，李 琳，胡乐鹏，何 晔，李 叶，任秀梅，靳 朝*，夏志平*，王本旭

(1.吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春130062；2.解放军军事医学科学院军事兽医研究所，吉林长春130017；3.北京军区疾病预防控制中心，北京100042)

流行性乙型脑炎是由日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)引起的一种对人类生命健康有很大威胁的急性人兽共患传染病，病死率高，后遗症严重，在亚洲地区发病率较高，而且在全球的流行有扩大的趋势[1-2]。JEV E蛋白具有血凝活性和中和活性，是病毒表面最重要的成分，它与病毒的吸附、穿入、致病和诱导宿主的免疫应答等作用紧密相关。因此，JEV E基因成为建立乙型脑炎特异性血清学检测方法及核酸疫苗研究的目的基因[3-4]。本实验以抗JEV E蛋白的单克隆抗体(MAb)作为固相筛选分子筛选噬菌体7肽库，并筛选出JEV E蛋白的抗原表位，为开展用JEV抗原表位探索JEV的防治研究创造了条件，为多肽疫苗研制、药物筛选以及特异血清学诊断方法的建立提供了依据。

1 材料和方法

1.1 病毒株及主要实验材料 JEV疫苗弱毒株SA14-14-2购自成都生物制品研究所；噬菌体随机肽库试剂盒购自美国New England Bio labs公司；受体菌为E.coli ER 2537由北京军区疾控中心分子生物学实验室提供；抗JEV E蛋白的MAb JEV-E1(1.136mg/m L)及兔抗JEV多克隆抗体由本实验室保存；TMB底物显色试剂盒购自中同生物公司；鼠抗M 13噬菌体HRP-IgG购自Pharmacia公司。

1.2 JEV E抗原表位的筛选 以抗JEV E蛋白的MAb作为固相筛选分子，应用噬菌体表面展示技术筛选噬菌体7肽库。每一轮筛选之后取1μL噬菌体测定滴度。待噬菌体得到高度富集后，挑取单克隆转接于低盐LB培养基中摇菌过夜，用ELISA方法检测其与MAb之间的特异性结合反应。……