黄德贵，潘长旺，常彦祥

(温州医学院，浙江温州325035)

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是重要的人畜共患病，其内毒素常常引起发病，A.hydrophila感染动物及人时，在体内还可以产生较强的胞外毒力因子，引起肠道疾病，尤其以食物中毒方式引起肠道疾病[1]。针对该菌的疫苗研究国内外已有报道，但利用超声波结合PEG制备疫苗的研究未见报道。本实验主要研究在超声波的物理作用下，以PEG为佐剂制成的PEG结合疫苗对鱼类免疫系统生理指标的影响和免疫保护力的效果，为相关学术研究及水产病害的防治提供借鉴与参考。

1 材料和方法

1.1 菌 种A.hydrophila采用微量生化鉴定管法从温州某农贸市场花蛤中分离筛选并鉴定。

1.2 试验用鱼 锦鲤(Cryprinus carpiod)为同源种群，体质量为180±20 g，体长为16±3 cm，养殖水温24℃～26℃，实验前驯养一周。

1.3 疫苗的制备A.hydrophila接种LB培养基，30℃恒温振荡培养24 h，离心收集菌体，用无菌PBS(pH7.4)洗涤3次，制成浓度1×108cfu/mL的菌液，备用。

福尔马林(FM)灭活疫苗(常规疫苗)：用0.15%福尔马林灭活，4℃过夜，离心收集菌体，用无菌PBS(pH7.4)洗涤3次，制成浓度1×108cfu/mL的菌液，备用。

超声灭活疫苗：经前期试验，25%PEG6000、PEG200菌液在冰浴中进行间歇超声后结合菌体最多，因此以 25%PEG6000、PEG200，超声功率300 W，超声时间设置为工作2 min，间歇1 min，总时长45 min进行超声灭活。

1.4 疫苗接种 每种疫苗分别接种70尾健康锦鲤，腹腔注射0.2 mL/尾，分4组：PEG6000组、PEG200组、FM组、对照组(注射PBS)，共需280尾锦鲤。第一次接种30 d后，进行第二次接种，疫苗的浓度是初次的5倍，腹腔注射0.2 mL/尾。

1.5 免疫指标的测定 二次免疫后，每隔10 d从各试验组随机取10尾鱼，尾静脉取血，每尾0.6±0.1 mL。全血室温静置3 h后，于4℃过夜，离心收集血清，分装，-20℃贮存备用；……