基于锁核酸探针的双重荧光实时RT-PCR检测方法鉴别新城疫中强毒株与弱毒株

2012-08-30秦智锋刘建利卢体康林庆燕吕建强曹琛福阮周曦曾少灵陈书琨廖立珊张彩虹花群义

中国预防兽医学报 2012年9期

秦智锋，刘建利，卢体康，林庆燕，吕建强，曹琛福，阮周曦，曾少灵，陈书琨，廖立珊，孙洁，张彩虹，花群义

（1.深圳出入境检验检疫局，广东深圳 518001；2.深圳市外来有害生物质检测技术研发重点实验室，广东深圳 518045）

新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）副黏病毒属I型（APMV-1）病毒，该病毒主要危害鸡、珠鸡和火鸡，能够在被侵袭的鸡群中迅速传播。NDV被我国列为一类传染病，也是世界动物卫生组织（OIE）须呈报的疫病，是国际动物产品贸易中重点检查的重大动物疫病。根据病毒株致病力的差异，将NDV分为强毒力型、中等毒力型及弱毒力型。NDV中强毒株在鸡群中传播迅速，危害严重[1]；而弱毒株仅引起鸡群呼吸道感染和产蛋量下降，多与其他疾病共同发病而造成一定的危害[2]。因此，建立鉴别NDV并有效区分中强毒株和弱毒株的新型快速分子生物学检测方法成为迫切要求，对有效控制疫情、降低经济损失具有重要意义。

锁核酸（Locked nucleic acid，LNA）是一种新型的寡核酸衍生物，与TaqMan探针相比，具有两个明显的优点：一是可增强热稳定性和杂交的特异性，二是LNA探针长度较短，可增加设计的灵活性。

本研究利用LNA探针技术，针对中强毒株和弱毒株特异序列分别设计了碱基锁定的LNA探针，极大地提高了探针的Tm值和特异性，并建立了同时鉴别诊断NDV中强毒株与弱毒株的双重荧光定量锁核酸RT-PCR（Duplex LNA rRT-PCR）检测方法。