闫廷赞，黄建安

(1.常州市第一人民医院呼吸内科，江苏常州213000;2.苏州大学附属第一医院呼吸内科，江苏苏州215000)

恶性胸腔积液是恶性肿瘤胸膜转移引起的，形成机制主要为胸膜通透性的增高和淋巴回流障碍。肺癌是最常见的病因，恶性胸腔积液的出现提示恶性肿瘤患者病程进展至晚期，预后差。但胸腔积液中含有丰富的免疫活性细胞，其有可能应用于肿瘤的免疫治疗。

树突状细胞(dendritic cell，DCs)是体内最有效的抗原递呈细胞，可以激活初始免疫应答，在机体免疫中有重要作用，近年成为肿瘤免疫治疗的热点［1］。本实验拟从恶性胸腔积液中分离DCs前体，体外诱导为DCs，通过检测其干扰素 － γ(interferon-γ，IFN-γ)、白细胞介素－10(interleukin-10，IL-10)的表达，评估对淋巴细胞的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 15例恶性胸腔积液标本选自我院收治的晚期肺癌患者，均经手术、纤维支气管镜等病理确诊，其中肺腺癌9例，鳞癌4例，小细胞癌2例。

1.2 DCs的诱导培养 常规胸腔穿刺获取恶性胸腔积液标本200～500 mL，加入肝素10 IU·mL－1抗凝，离心获取细胞沉渣，以Hanks液混悬细胞。在离心管中依次加入100%Ficoll、75%Ficoll(以含体积分数10%胎牛血清的RPMI-1640配制)及细胞悬液，使之形成3层具有2个清晰界面的液体，2 000 r·min－1离心30 min后，收集100%及75%Ficoll层间的细胞，洗涤后以含10%FCS的RPMI-1640调整细胞浓度为3～5×106mL－1，加入 6 孔板中(每孔 2 mL)，体积分数5%CO2、37℃培养箱中培养2 h后，轻轻吹打吸出悬浮细胞，贴壁细胞以 GM-CSF(100 mg·L－1)、IL-4(20 mg·L－1)、体积分数10%胎牛血清的RPMI-1640培养6 d，再加入 TNF-α(20 mg·L－1)继续培养3 d。

1.3 DCs的表型分析 收集恶性胸腔积液培养6、9 d DCs孔中悬浮及半悬浮细胞，PBS洗涤后分至试管中，每管……