仔猪感染猪繁殖与呼吸综合征病毒的病毒定位研究
2012-08-14桑传兰多海刚董浩然
桑传兰,王 萧*,多海刚,陈 嘉,梁 朗,董浩然
(1.广州中医药大学实验动物中心,广东广州510405;2.广东蓝岛生物技术有限公司,广东广州510555)
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproduction and respiratory syndrome,PRRS)是20世纪80年代末期90年代初期出现的一种病毒性传染病,PRRS主要引起母猪和后备母猪的繁殖障碍和仔猪的呼吸道症状。近年来关于PRRS的病原学、流行病学、临床症状和血清学诊断等方面已有大量报道,但至今对本病的发病机理还不清楚。本试验旨在用天津地区分离株PRRSV-SJ株滴鼻感染10日龄~15日龄PRRSV阴性的健康仔猪,观察PRRSV在仔猪体内靶器官的分布规律,明确其病毒的致病特点和发展规律,为进一步研究PRRSV的致病机理奠定基础,同时也为制定科学的防控措施提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验用动物 10日龄~15日龄健康的仔猪20头,经美国IDEXX公司PRRSV ELISA试剂盒检测为阴性,购自天津种猪场。
1.1.2 试验用病毒 PRRSV-SJ株由天津畜牧兽医研究所病毒室分离并保存,TCID50为10-5.58/0.1 mL。
1.1.3 主要试剂 PRRSV MAb 15A1来源于美国,由农业部兽医诊断中心提供;辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L)为北京中山生物技术有限公司进口分装产品;50mL/L的马血清(PBS稀释)为北京中山生物技术有限公司产品;3.3-二氨基联苯胺四盐酸盐(DAB)为北京市联合化工厂产品;苏木素(hematoxylin,进口分装)为北京化学试剂公司产品。
1.2 方法
1.2.1 人工感染方法 15头仔猪滴鼻接种PRRSV-SJ毒株,3mL/头,每日测量体温,观察临床症状,并于感染后1、7、14、21、28d各处死3头。对照组5头滴鼻正常细胞培养物,3mL/头,与感染组相对应的时间,各处死1头。
1.2.2 取材 剖检取出的气管(中部)、肺、脾脏、扁桃体、淋巴结(肺门淋巴结、颈下淋巴结、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结)肾脏等新鲜组织病料放入100 mL/L的中性缓冲福尔马林液中固定。……
