耿 岗

（青海省海西州乌兰县畜牧兽医工作站，青海乌兰817100）

新城疫病毒属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）副黏病毒亚科（Paramyxovirinae）中的禽腮腺炎病毒属（Avulavirus），是一种不分节段的单链、负链RNA病毒［1-2］。由NDV引起的新城疫（Newcastle disease，ND）是一种多病型的高度接触性、急性、烈性传染病，可感染火鸡、家禽以及野禽类，具有传播速度快、发病率高、病死率高等特征，已经在世界范围内引起了4次大流行，给全球养禽业带来了巨大的经济损失［3-8］。该病也是困扰我国养禽业的重要疫病，几十年来一直是我国养禽业坚持预防免疫控制的主要传染病之一［9-11］。该病的存在严重制约着我国养禽业的健康发展，同时对我国禽类产品的出口、食品安全以及人类健康都存在着潜在的危害［11］。因此，加强NDV诊断技术的研究，对预防和控制本病以及人类健康都具有十分重要的现实意义。NDV常规的病毒分离技术和免疫血清学检测方法存在操作复杂、费时费力、检测周期较长等缺点，不能满足快速、准确诊断的需要。鉴于此，本研究建立了一种敏感、特异、准确、简单、快速的一步法RT-PCR方法，为ND的早期诊断、流行病学调查等提供一种有效的检测技术手段。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病毒 新城疫病毒（NDV）、传染性支气管炎病毒（IBV）、传染性喉气管炎病毒（ILTV）、传染性法氏囊病病毒（IBDV）均由青海省动物疾病中心实验室保存。

1.1.2 主要试剂 质粒提取试剂盒、胶回收试剂盒、Trizol为上海生工生物工程技术服务有限公司产品；一步法RT-PCR试剂盒为宝生物工程（大连）有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 引物设计与合成 根据已发表的NDV基因组序列，利用生物学软件设计合成一对引物，NDVP1：5′-GGCCGCAGCTCTGATACAA-3′；……