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欧洲型和美洲型PRRSV双重PCR 检测方法的建立

2012-08-14张松林张太翔马永彪王文秀沈志强

动物医学进展 2012年12期
关键词:检测

张松林,刘 磊,张太翔,马永彪,王文秀,肖 娜,沈志强,*

(1.山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600;2.山东省绿都生物科技有限公司,山东滨州256600;3.潍坊出入境检验检疫局,山东潍坊261041)

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)于1987在美国首次发现,目前该病已在全世界范围内流行,对养猪业造成了重大的经济损失。在美国,每年因为PRRS造成的经济损失达6.6亿美元[1]。该病的主要特征是母猪繁殖障碍,哺乳仔猪死亡率升高,各年龄段猪特别是哺乳和保育阶段仔猪的呼吸道疾病以及生长和育肥猪的流感样症状。在我国,自1996年首次分离到PRRSV以来,尤其2006年春季流行的高致病性PRRS给我国的养猪业带来了巨大的经济损失[2-3]。按照血清型和遗传性差异,PRRSV可划分为欧洲型(基因I型,代表株Lelystad virus,LV)和美洲型(基因Ⅱ型,代表株VR2332)。目前,根据世界各地分离株的基因变异程度,欧洲型和美洲型PRRSV又被划分为几个不同的系统进化树[4]。

PRRSV属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属(Arterivirus)成,其基因组为不分节段的单股正链RNA,全长约15.1kb~15.5kb,直径为50nm~65 nm,包括9个开放读码框(ORF1a,ORF1b,ORF2~7)。PRRSV基因组两端为对RNA合成过程起调控作用的非编码区,其中5'端具有甲基化的帽状结构和3′poly(A)尾[5-7]。ORF1a和 ORF1b约占全基因组的75%,通过核糖移码机制,翻译得到2个大的聚合蛋白pp1a和pp1ab。通过4种蛋白酶(位于Nsp1的PCPa、PCPβ,位于 Nsp2的CP,位于 Nsp4的SP),RNA依赖性RNA聚合酶(NSP9),解旋酶(NSP10),核酸内切酶(NSP11)的作用,pp1a和pp1ab被切割产生14个非结构蛋白(non-structural proteins,NSPs)[6-7]。迄今为止,除了复制、切割、聚合酶活性外,关于这些非结构蛋白的其他功能还知之甚少。

欧洲型和美洲型PRRSV之间存在抗原性差异,二者结构蛋白氨基酸同源性为55%~79%。……

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