郝明飞，张 琳，胡北侠，崔言顺，张秀美＊

（1.山东农业大学，山东泰安271018；2.山东省农业科学院畜牧兽医研究所，山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，山东济南250100）

自2010年4月以来，我国东南部分省份（包括山东、江苏、浙江、广西等）很多鸭场暴发了一种以产蛋严重下降为主要特征的传染病，给中国的养鸭业带来了极大的经济损失，后来证实该病是由黄病毒科黄病毒属蚊媒病毒类恩塔亚病毒群中的鸭坦布苏病毒（Duck tembusu virus，DTMUV）所引起［1-3］。

鸭坦布苏病毒的病毒粒子直径40nm～50nm，有脂质囊膜。病毒基因组为单股正链RNA，大小为10.9kb。5′端和3′端各有一非编码区，其余基因为一个开放阅读框，从5′-3′依次编码C蛋白（核衣壳蛋白）、prM／M 蛋白（囊膜蛋白）、E 蛋白（包膜蛋白）、非结构蛋白 NS1-NS2-NS3-NS4-NS5［4］。其中E基因全长1 503bp，氮端含有的内部信号肽，为prM／M基因的一部分［5］。E蛋白是黄病毒主要的结构蛋白，在病毒吸附、与宿主细胞膜融合以及病毒组装过程中具有重要的作用。同时E蛋白也是黄病毒主要的病毒抗原，含有多种抗原表位，可通过诱发中和抗体产生保护性免疫应答［6-8］。

本研究对鸭坦布苏病毒E基因进行了克隆表达、免疫原性的检测，并初步建立了快速检测DTMUV抗体的间接ELISA方法，为该病的快速检测和流行病学调查提供了技术手段。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 毒株、菌种及质粒 鸭坦布苏病毒毒株由山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室分离、鉴定、保存；E.coli DH5α、BL21（DE3）为北京全式金生物技术有限公司产品；pMD18-T vector为宝生物工程（大连）有限公司产品；原核表达载体pET-21a（＋）为山东省动物疫病防治与繁育重点实验室保存。……