龙 文，邱李恒，孟 超，林岩松

1中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院核医学科，北京 100730

2北京大学人民医院核医学科，北京 100044

Graves病是一种主要累及甲状腺的自身免疫性疾病，目前在动物身上尚无自发发生的报道。自上世纪90年代中期起，研究者们便开始给动物注射促甲状腺激素受体 (thyroid-stimulating hormone receptor，TSHR)蛋白诱导Graves病，但均未取得满意结果。20世纪末，有研究者通过注射具有免疫活性的细胞制备小鼠模型，并成功诱导产生了TSHR抗体(thyroid stimulating antibody，TSAb)［1-2］。得益于基因工程的发展，研究人员通过注射含TSHR基因或其片段的裸质粒或腺病毒制备Graves病模型，取得了较好的效果［3-5］。Chen等［6］研究发现，TSHR 蛋白的A亚基 (A subunit of thyroid-stimulating hormone receptor，TSHRA)基因可能较TSHR全长基因能够产生更高水平的TSAb。此后，Kaneda等［7］通过电穿孔直接把TSHRA基因转染入小鼠肌肉细胞，不仅取得了较高的表达率，而且得到了持久的TSAb表达，进而距离成功的Graves病动物模型又近了一步。近年来，又出现了注射牛甲状腺球蛋白诱导Graves病的尝试［8］，但需要很漫长的探索过程。由于用腺病毒或电穿孔方法对技术要求较高，耗资较大，而脂质体注射是目前常用的一种简便的转基因手段，尚未用于Graves病动物模型研究，本研究拟以脂质体注射的形式免疫雌性Balb/c小鼠诱导Graves病，并比较了不同质粒载体、目标基因和免疫程序对诱导率的影响。

材料和方法

材料 TSHR cDNA、Lipofectine TM2000(美国Invitrogen公司)，EcoRⅠ 和NotⅠ限制性内切酶 (日本 TaKaRa公司)，Escherichia coli DH5α、Escherichia coli BL21(DE3)、pUBC质粒、pCDNA3.1(+)，pETis质粒［中国医学科学院医学实验动物研究所提供，由pET28a(+)质粒改造而来］，DNA凝胶回收试剂盒、质粒DNA小量提取试剂盒、T4 DNA连接试剂盒、PCR用 Taq酶等材料 (美国 Axygen公司)，游离三碘甲状腺原氨酸 (FT3)及游离甲状腺素(FT4)放射性免疫分析药盒 (北方生物所)。……