黄 凯 崔广晖 赵 松 李玮浩 (郑州大学第一附属医院胸外科，河南 郑州 450052)

肺癌是最常见的原发恶性肿瘤，是一种严重威胁人类健康的常见病。许多研究发现细胞凋亡失衡在肿瘤的发生、发展中也起着重要作用。Bcl－2结合抗凋亡基因－1(BAG－1)是20世纪90年代初发现的一种抗凋亡基因，其编码的蛋白是一种多功能结合蛋白，具有增强肿瘤细胞抗凋亡的能力。BAG－1基因在肺癌的发生、发展中的作用及机制并未完全明确。本研究采用免疫组化方法研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织细胞中BAG－1基因和Caspase－3基因的表达及其相互关系，探讨BAG－1基因和Caspase－3基因在肺癌发生发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 标本来源 我科手术切除的NSCLC组织标本75例，其中男54例，女21例，年龄31～76岁，平均52.3岁。所有病人术前均未接受过化疗和放疗。经病理学检查证实为肺癌，其中鳞癌43例，腺癌32例;低分化31例，中分化和高分化癌44例。根据国际抗癌联盟2009年修订的肺癌分期标准:Ⅰ期+Ⅱ期40例，Ⅲ期+Ⅳ期35例;伴有淋巴结转移者52例，无淋巴结转移者23例。

1.2 主要实验试剂 兔抗人 BAG－1多克隆抗体、鼠抗人Caspase－3单克隆抗体抗体均购于上海威奥生物科技有限公司，多聚赖氨酸玻片处理剂购于武汉博士得生物工程公司。

1.3 方法 石蜡标本制成3 μm厚的切片。常规脱蜡，梯度乙醇脱水，微波抗原修复，内源性过氧化物酶阻断15 min，分别滴加BAG－1多克隆抗体(1∶125)和 Caspase－3单克隆抗体(1∶100)，置27℃孵育60 min，Ⅱ抗37℃孵育 30 min，Ⅲ抗 37℃孵育30 min，DAB显色4～8 min，苏木精复染后，脱水、透明、封固后光镜下观察。用已知的阳性切片染色作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。……