夏小慧，胡 扬，张腾国，陈 婷

(1兰州城市学院，甘肃 兰州 730070;2北京体育大学，北京 100084;3西北师范大学，甘肃 兰州 730070)

葡萄糖是机体生命活动中最重要的能源物质之一。机体利用葡萄糖的首要步骤是在转运蛋白的介导下实现葡萄糖的跨膜转运。葡萄糖转运蛋白4(solute carrier family 2，facilitated glucose transporter，member 4 protein，SLC2A4)是存在于人类骨骼肌中的主要亚型，是骨骼肌吸收和利用葡萄糖的关键限速物质［1］。rs5418位点是位于SLC2A4基因启动子区－30 bp处的 G→A变异，在不同人群中分布不同［2］。该位点多态与能量代谢相关的表型如糖尿病［3］、肥胖症［2］等的发生相关联。本课题组前期通过对优秀耐力运动员和普通人该位点多态性的研究，也发现该位点多态与优秀运动员的有氧耐力相关联(结果未发表)。为进一步研究该位点变异是否会影响下游基因表达，本文通过分子生物学方法，检测rs5418位点携带不同等位基因的重组表达载体启动下游报告基因的活性，以探讨位点变异与能量代谢相关表型相关联的分子机制。

材料和方法

1 材料

Taq DNA polymerase、dNTP 和 DNA marker DL2000购自Sangon;Kpn I、HindⅢ内切酶、PCR胶回收试剂盒购自TaKaRa;琼脂粉、胰蛋白胨和酵母粉购自OXOID;T4 DNA连接酶、pGL3－basic、pGL3－promoter、pRL－TK载体、双萤光素酶报告系统试剂盒、快速转染试剂盒和基因组DNA纯化试剂盒均购自Promega;In－FusionTMAdvantage PCR Cloning Kit试剂盒购自Clontech;胎牛血清购自HyClone;质粒提取及纯化试剂盒购自Omega;胰蛋白酶购自Difco;RPMI－1640培养基购自Gibco;其它常用试剂均为国产分析纯。TOP10感受态细胞购自Novasygen;HEK293T细胞由中国农业大学动物医学院惠赠。

2 方法

2.1 SLC2A4基因启动子序列的扩增 在GenBank数据库中查找人类SLC2A4基因序列位于第17号染色体(RefSeq:NG_012127.1)，基因全长 6314 bp。……