赵 轶 李亚军

(河北联合大学秦皇岛分院 河北秦皇岛 066000)

氨基葡萄糖(glucosamine)和硫酸软骨素(chondroitin sulfate)是一类天然的氨基葡聚糖，广泛存在于人和动物软骨、肌键和韧带中，为关节软骨的主要组成部分［1］。氨基葡萄糖和硫酸软骨素在自然界中广泛存在，主要从虾蟹壳类海洋生物及动物软骨中提取［2］。越来越多的研究证明，氨基葡萄糖与硫酸软骨素能刺激软骨细胞合成胶原蛋白和蛋白多糖，促进软骨基质的合成，抑制软骨的降解。这类物质不仅能延缓关节炎的发展，而且还能修复软骨组织［3］。本研究将氨基葡萄糖与硫酸软骨素制成复合片剂，测定了氨基葡萄糖与硫酸软骨素制成复合片的溶出度，并研究复合片的抗炎作用。

1 材料与方法

1．1 仪器 TU1810紫外－可见分光光度计(北京普析通用公司);ZQSP8旋转压片机(上海天祥制药机械有限公司);FA－1004电子天平(上海精科天平厂);RCZ－8A智能药物溶出仪(天津大学精密仪器厂);BJ－1型智能崩解时限仪(天津新天光分析仪器有限公司)。

1．2 药品 氨基葡萄糖和硫酸软骨素对照品(中国药品生物制品检定所);氨基葡萄糖(济南海得贝生物工程公司);硫酸软骨素(上海道丰化工科技有限公司);羧甲基淀粉钠(山东海祥生物工程有限公司);交联聚乙烯吡咯烷酮(上海协泰化工有限公司);硬脂酸镁(上海协泰化工有限公司);微晶纤维素(北京化学试剂公司);角叉菜胶(辽宁省药物研究所);阿斯匹林肠溶片(石家庄康力药业有限公司)。

1．3 实验动物 健康清洁级雄性SD大鼠，体质量150～180g，购于北京实验动物有限公司，许可证号:SCXK(京)2007－0001。

1．4 复合片中氨基葡萄糖与硫酸软骨素含量测定 取2mL乙酰丙酮，加至50mL碳酸钠溶液中即为乙酰丙酮试液。称取对二甲氨基苯甲醛0．8g，加无水乙醇和12mol/L盐酸各15mL，混匀即为对二甲氨基苯甲醛试液。称取50mg咔唑溶于50mL 95%乙醇中即为咔唑试剂。精密称取25mg干燥后的氨基葡萄糖对照品，置25mL量瓶中，加水定容，取5mL溶液置100mL量瓶中，定容后作为氨基葡萄糖标准溶液。取氨基葡萄糖标准溶液 0．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0mL 置 10mL 具塞试管中，加水定容至5mL，加1mL乙酰丙酮试液，置于沸水浴中乙酰化15min。冷却后，加入3mL无水乙醇和1mL对二甲氨基苯甲醛试液60℃水浴1．5h，冷却至室温，测定反应液在520nm处的吸收值，得直线回归方程:Y=1．401X+0．04379，r=0．9997，线性范围为25 ～125μg/mL。取硫酸软骨素标准溶液 0．1、0．2、0．4、0．6、0．8、1．0mL，置于 10mL 带塞试管中，并加水定容至 1mL。加6mL浓硫酸，混匀后置85℃温浴20min，冷却至室温，加入0．2mL咔唑试剂，振摇，室温放置2h，测定反应液在530nm处的吸收值，得直线回归方程:Y=1．152X+0．1173，r=0．9993，线性范围为20～100μg/mL。

1．5 氨基葡萄糖与硫酸软骨素复合片的制备 将氨基葡萄糖与硫酸软骨素按质量比5:4的比例混合再与辅料微晶纤维素混合过筛，综合考虑片剂外观和崩解时间2个因素，选择聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠2种崩解剂联合使用，加入5%的聚乙烯吡咯烷酮制成软材，以20目筛制粒，80℃干燥4h，加入适量润滑剂硬脂酸镁，混合均匀后在ZQSP8旋转压片机中压片。复合片每片含主药250mg。

图1 复合片中氨基葡萄糖与硫酸软骨素的溶出度曲线

1．6 氨基葡萄糖与硫酸软骨素复合片的溶出度考察 取复合片样品，按《中国药典》2010年版二部附录ⅩC第一法测定片剂的溶出度［4］，以1 000mL的人工胃液为溶出介质，采用桨法，转速100r/min，温度为37℃，依法对复合片进行溶出度测定，每次取溶液2mL，滤过，取续滤液1mL，置10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，依法测定氨基葡萄糖与硫酸软骨素的含量，绘制溶出度曲线。见图1。1．7 氨基葡萄糖与硫酸软骨素复合片抗急性炎症试验［5］SD大鼠50只，适应性喂养1周后随机分为5组，每组10只。分别为正常对照组(灌胃给予蒸馏水)、阿斯匹林阳性药物组(200mg/kg)、氨基葡萄糖与硫酸软骨素复合片低剂量组(225mg/kg)，中剂量组(450mg/kg)，高剂量组(900mg/kg)3个受试物剂量组。经口灌胃给药，1次/d，连续给药28天。第28天，各组大鼠均以角叉菜胶(1%)皮下注射于左后足趾中部，0．1mL/只。分别于注射角叉菜胶后1h、4h和6h运用千分卡尺测量足趾肿胀厚度，读数精确到0．02mm。同时右后足作为对照。计算足趾肿胀度(左右足趾厚度差)。

表1 大鼠给药28天后足跖肿胀度(±s，n=10)

表1 大鼠给药28天后足跖肿胀度(±s，n=10)

注:与正常对照组比较，▲P ＜0．05

足跖肿胀度(mm)1．74 ±0．64 2．50 ±0．77 2．64 ±0．41阿司匹林组 200 1．18 ±0．35▲ 2．02 ±0．37▲ 1．82 ±0．50▲低剂量组 225 1．37 ±0．28▲ 2．21 ±0．59▲ 2．14 ±0．72▲中剂量组 450 1．50 ±0．42▲ 1．85 ±0．67▲ 1．89 ±0．56▲高剂量组 900 1．48 ±0．32▲ 1．71 ±0．46▲ 1．32 ±0．42 1h 4h 6h对照组组别 剂量(mg/kg)▲

1．8 统计学处理 所有数据均用SPSS 12．0进行统计学分析，采用方差分析及两两比较的q检验方法对数据进行统计学分析。见表1。

2 结果

氨基葡萄糖与硫酸软骨素复合片溶出度结果显示，复合片中的氨基葡萄糖与硫酸软骨素40min之内溶出度均超过70%，说明复合片中氨基葡萄糖与硫酸软骨素溶出速率较快，而且氨基葡萄糖较硫酸软骨素溶出速率更快。给药28天，注射角叉菜胶后1、4、6 h，阿司匹林阳性药物组、低、中、高剂量组均能抑制大鼠因角叉菜胶引起的急性炎症(P＜0．05)。与阿司匹林阳性药物组比，氨基葡萄糖与硫酸软骨素复合片低、中、高剂量组大鼠足趾肿胀度无显著性差异(P＞0．05)。

3 讨论

制备的氨基葡萄糖与硫酸软骨素复合片符合《中国药典》2010年版溶出度之规定。氨基葡萄糖与硫酸软骨素复合片溶出速度均较快，因此将氨基葡萄糖与硫酸软骨素制成复合片将会更好地发挥氨基葡萄糖与硫酸软骨素的药效。

［1］ 郭 亭，赵建宁．氨基葡聚糖和硫酸软骨素在治疗骨性关节炎中的应用［J］．中国骨伤，2004，17(9):574

［2］ Silva FS，Yoshinari NH，Castro RR，et al．Combined glucosamine and chondroitin sulfate provides functional and structural benefit in the anterior cruciate ligament transection model［J］．Clin Rheumatol，2009，28(2):109

［3］ Poolsup N，Suthisisang C，Channark P，et al．Glucosamine long － term treatment and the progression of knee osteoarthritis systematic review of randomized controlled trials［J］．Ann Pharmacother，2005，39(6):1080

［4］ 中华人民共和国药典委员会．中华人民共和国药典［S］．北京:化学工业出版社，2010．101

［5］ 傅 欣，林 霖，魏学磊，等．氨基葡萄糖和硫酸软骨素联合用药对兔骨关节炎治疗作用实验研究［J］．中国运动医学杂志，2008，27(5):588