王会玲 丁婷婷 许 烨 张金元

骨骼肌消耗是慢性肾脏病(CKD)蛋白质-能量消耗的重要特征，与尿毒症时体内毒素蓄积、代谢性酸中毒、胰岛素抵抗、神经内分泌异常、微炎症状态等因素，引起骨骼肌蛋白质分解代谢加剧有关[1，2]。研究提示CKD时机体调控蛋白质分解的主要途径——泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin proteasome system,UPS)激活，使肌肉特异性的E3连接酶：肌肉萎缩蛋白Fbox-1(muscle atrophy F-box,MAFbx,也称作Atrogin-1)和肌环指蛋白1 (MuRF-1)表达升高，引起肌肉蛋白质分解加速，与CKD骨骼肌消耗关系密切[3,4]。既往研究显示，内源性糖皮质激素(endogenous glucocorticoids，eGC)水平升高与CKD小鼠模型的骨骼肌消耗有关[5]，临床血液透析患者的eGC水平可升高5倍，并与透析患者的营养不良和肌肉消耗密切相关。阻断糖皮质激素(GC)信号能否改善肾衰竭时的骨骼肌消耗，目前尚未见报道。本研究观察肌肉特异性糖皮质激素受体(GCR)基因敲除(MGRKO)小鼠，在CKD状态下的骨骼肌消耗，并探讨其作用机制。

材料与方法

材料与试剂MGRKO小鼠由美国Baylor医学院肾脏病与内分泌实验室提供。采用loxP floxed GR-Cre体系制作MGRKO小鼠，以同源lox/lox小鼠为对照。OCT包埋剂 (Tissue-Tek，USA)；GC检测试剂盒EIA kit (Cayman，500651)；总RNA提取试剂盒(TRIzol Reagent,invitrogen)；反转录试剂盒SuperScriptⅢ first Strand Synthesis System for PCR (invitrogen)；Real-time PCR试剂盒iQ SYBR Supermix (Bio-Rad)；组织裂解液(CellLytic TM MT，Sigma)；超速低温离心机(Micromax RF)；冰冻切片机(Leica CM1850)；荧光定量PCR热循环仪(美国ABI,Applied Biosystems 7500)；Image J v1.36 图像处理软件(NIH)。

采用5/6肾切除制作CKD小鼠模型小鼠均为8周龄，体重25.4～26.8g，正常、自由饮食。小鼠腹腔注射克他命麻醉后，无菌条件下切除左肾上、下两极各约1/3皮质，止血后将残肾送入腹腔，依次缝合腹膜和皮肤，然后摘除右肾。假手术组(CTL组)依照同样步骤给予麻醉和打开腹腔，暴露肾脏1 min后将肾脏送入腹腔，关腹。……