余 琦，李 宁，宋业颖，李彩云，杨江辉 (解放军第309医院病理科，北京 100091)

结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis)引起的结核病为世界三大传染病之一［1］。近年来，我国结核病发病率持续上升，肺结核患病人数居全球第二位，结核病的发病率和死亡率在我国27种法定传染病中均占据首位。传统的结核杆菌检测法如细菌培养法、抗酸染色法等检测时间周期较长，或阳性率低，漏检率较高。为了克服以往检测方法的固有缺陷，需要发展敏感性高、特异性强的结核杆菌快速检测技术［2］。随着分子生物学技术的成熟发展，荧光定量PCR(FQPCR)技术已被广泛应用于各种临床病原体的检测。本文采用FQ-PCR检测法对石蜡包埋病理组织中的结核分枝杆菌DNA(TB-DNA)进行检测，并与抗酸染色和组织病理形态学检查进行比较，评价其在结核分枝杆菌检测中的临床应用价值［3］。

1 资料与方法

1.1 标本来源

2011年2月至2012年2月期间我院临床诊断肺结核的病理组织石蜡包埋标本196例，其中肺穿刺活检组织标本62例，胸膜活检组织标本60例，淋巴结穿刺活检标本30例，支气管活检组织标本46例。

1.2 主要试剂与仪器

TB-DNA探针及引物试剂盒(北京新基永康基因科技有限公司提供)，SLAN全自动荧光定量PCR检测仪(上海宏石医疗科技有限公司提供)，苯酚品红染液，4%NaOH溶液。

1.3 PCR 检测方法

将蜡块组织切取5μm薄片装入EP管中，每切取1例标本之后，即采用0.3%次氯酸钠消毒液清洁刀口及周围部分，防止污染，将EP管中加入220μl buffer TL，90℃ 1 h。室温放置1 min，12000 r/min离心2 min，小心穿过石蜡层，吸取200μl液体(包含组织)转至新的1.5 mL EP管，加入20μl OB蛋白酶，简短离心，收集管盖上液体。……