慈姑多糖降血糖的生物活性研究

2012-07-03罗永会张翠香徐春萍

大理大学学报 2012年12期

罗永会，张翠香，徐春萍

（大理学院基础医学院，云南大理 671000）

糖尿病是血糖的来源和去向失衡的一种常见的内分泌代谢性疾病。糖尿病发病率高、并发症多、死亡率高，严重威胁人类健康。且病因不明，目前无法根治，治疗仅限于控制血糖水平，除注射胰岛素外，主要口服磺脲类和双胍类降血糖药物，但长期服用这类降糖药物不良反应显著〔1-5〕。而天然降糖食品则来源广泛、高效、毒副作用极小。研究发现，植物多糖具有多种生物活性，具免疫调节功能，能提高机体免疫功能、抗菌、抗病毒、抗肿瘤作用、抗肥胖、降胆固醇、降血脂、降血糖等作用。且大多数植物多糖降血糖作用的途径广泛，降糖作用明显〔6-11〕，在临床上有广泛的使用价值〔4〕。

本研究以药食同源、具有较高的药用和保健价值的慈姑〔12〕作原料，参考多种植物多糖的提取工艺，通过实验确定了慈姑多糖水提醇沉的最佳提取条件，制得慈姑粗多糖，经脱蛋白纯化后得精制慈姑多糖，并以昆明种小鼠为实验对象，观察慈姑多糖对四氧嘧啶性糖尿病模型小鼠血糖的影响，对慈姑多糖降血糖生物活性进行了研究，以期为慈姑的开发研究提供参考。

1 材料

1.1实验材料石油醚（沸程60℃～90℃）、无水乙醇、氯仿、正丁醇（洛阳市化学试剂厂生产）均为分析纯。消渴丸（广州中一药业有限公司，批号：p02163），四氧嘧啶（alloxan，ALX），Sigma公司；艾科血糖试纸。

1.2实验仪器BT-224S型电子天平（德国赛多利斯仪器公司）；HH－4数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）；TDL－4A低速离心机（上海菲恰尔仪器有限公司）；RA－6000旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器）；艾科血糖仪。

1.3实验动物昆明种小鼠（雌雄各半），体重25 g以上，由大理学院实验动物科提供。

2 方法

2.1慈姑多糖的制备称取一定量的慈姑粉，加入10倍体积的石油醚于回流装置中，60℃回流3 h，过滤，滤渣晾干，用10倍体积80%乙醇80℃回流2 h，以除去单糖，多酚，低聚糖和甙类小分子物质，过滤，滤渣晾干得脱脂慈姑样品〔13-14〕。按料液比1∶15（g/mL）加入蒸馏水，于70℃水浴浸提3 h，过滤，滤渣重复浸提1次，合并提取液，浓缩至适当体积，加入95%的乙醇，使乙醇终浓度达80%（v/v）。充分搅拌后4℃下静置24 h，离心收集沉淀。沉淀溶于少量蒸馏水中，用Sevage法（多糖溶液∶氯仿∶正丁醇＝25∶5∶1）脱蛋白，反复进行至无蛋白层后，取水层加入95%的乙醇，使含醇终浓度达80%（v/v），充分搅拌后4℃下静置24 h，离心收集沉淀，并用无水乙醇、乙醚、丙酮反复洗涤多次，60℃以下低温干燥至恒重，得慈姑多糖。

2.2动物造模健康昆明种小鼠50只，适应性喂养7 d，随机选取10只为正常对照组，给予基础饲料，其余40只禁食不禁水12 h后，以190 mg/kg四氧嘧啶一次性皮下注射（四氧嘧啶溶解于生理盐水中，现配现用）致实验性糖尿病。注射后72 h，禁食不禁水12 h，断尾取血，用血糖仪测空腹血糖值，以血糖值大于11.1 mmol/L的小鼠作为高血糖模型动物〔10-14〕。

2.3分组和给药糖尿病模型小鼠随机分成4组，每组10只。分别为糖尿病模型对照组，慈姑多糖高剂量组、低剂量组，阳性对照组。慈姑多糖高剂量组、低剂量组每天分别灌胃（以下简称ig）给予慈姑多糖0.75 g/kg、0.375 g/kg，阳性对照组ig0.625 g/kg消渴丸，糖尿病模型对照组及正常对照组则ig等体积生理盐水（NS），连续给药14 d，实验期间动物自由摄食。

2.4检测指标试验给药至第7天、第14天时，禁食不禁水12 h，断尾取血，用血糖仪测空腹血糖值〔15〕。

2.5统计学处理所有数据用SPSS17.0软件进行分析，计量资料结果以均数±标准差（±s）表示，P＜0.05表示差异有统计学意义，统计学处理采用t检验。

3 实验结果与分析

慈姑多糖对啶糖尿病模型小鼠血糖的影响。见表1。

表1 慈姑多糖对糖尿病小鼠空腹血糖的影响

由表1可知，与正常组比较，以190 mg/kg注射四氧嘧啶72 h后，各组小鼠空腹血糖变化差异显著（P＜0.05）即造模成功；给药后与模型组比较，阳性对照组、慈姑多糖高剂量组、低剂量组血糖明显降低（P＜0.05）；与0 d（灌药前）比较，7 d阳性对照组、慈姑多糖高剂量组小鼠空腹血糖变化差异显著（P＜0.05）；与0 d（灌药前）比较，14 d阳性对照组、慈姑多糖高剂量组、低剂量组小鼠空腹血糖变化差异显著（P＜0.05），表明慈姑多糖具有一定的降血糖作用，并且慈姑多糖高剂量组降血糖效果较低剂量组明显。与7 d比较，14 d正常组、阳性对照组、慈姑多糖高剂量组、低剂量组小鼠空腹血糖变化差异不显著（P＞0.05），表明慈姑多糖不影响正常小鼠空腹血糖。

四氧嘧啶是一种特异性的B细胞毒剂，可选择性地损坏多种动物的胰岛B细胞，引起实验性糖尿病。四氧嘧啶糖尿病模型是研究糖尿病治疗药物疗效的常用动物模型〔16〕。实验表明，慈姑多糖能使四氧嘧啶型糖尿病小鼠的血糖降低，但对正常小鼠空腹血糖无明显影响，提示慈姑多糖可能具有一定的防治糖尿病作用。有关慈姑多糖的降糖机制有待进一步研究。

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