刘 果，何永红，万呼春，钟晓波，齐 进△

（1.重庆医科大学附属口腔医院400015；2.口腔疾病研究国家重点实验室/四川大学，成都610041；3.四川大学华西口腔医院内科，成都610041）

变异链球菌（streptococcus mutans，以下简称变链菌）属革兰阳性球菌，以其较强的产酸、耐酸及黏附能力成为牙菌斑生物膜中的优势菌，是导致龋病的重要致病菌之一［1］。目前，已有研究表明，多种药物成分可有效抑制变链菌生长，但具体作用机制未知。双向电泳（two－dimensional electrophoresis，2DE）作为蛋白质组学研究的核心技术，能够对近万种蛋白质实现分离，动态分析细菌蛋白质的表达变化，在研究致龋机制、药物抑菌机制等方面具有重要意义［2－4］。而如何增大样品蛋白质的提取量并提高其溶解度是蛋白质组研究的关键步骤［5］。超声法破碎细菌提取样品蛋白质是常用方法，本研究采用超声法破碎细菌，并对如何提高蛋白质的提取效率进行研究，为开展变链菌的蛋白质组学进行探索，为变链菌致龋机制的研究提供基础。

1 材料与方法

1.1 主要仪器和试剂 变异链球菌ATCC25175（四川大学口腔疾病研究国家重点实验室提供），TPY培养基，裂解液（30 mmol/L Tris－Hcl，7mol/L脲，2mol/L硫脲，4%CHAPS，1%DTT，5mmol/L PMSF），RC DC 蛋白定量试剂盒（BIO－RAD公司，美国），超声破碎仪（Sanyo公司，日本），微型垂直电泳系统和BIO－RAD 2000凝胶成像分析系统（BIO－RAD 公 司，美国）。

1.2 实验方法

1.2.1 细菌培养及收集 细菌复苏后接种TPY琼脂平板，37℃兼性厌氧（80%N2，10%H2，10%CO2）培养24h，挑取单菌落接种TPY液体培养基，37℃兼性厌氧培养18h，收集菌悬液。4℃12 000×g离心10min，弃上清液，细菌沉淀用含氯霉素（100μg/mL）双蒸水洗涤2次后重悬于不含氯霉素的双蒸水中。……