李 晨 邢少军 段学章 胡瑾华 柳芳芳 王慧芬 万谟彬

每年约有2%～6%未经治疗的慢性乙型肝炎患者进展为乙型肝炎肝硬化[1]。研究表明调节性T 细胞（Regulatory T cells，Treg cells）和 IL-10 在体内发挥免疫抑制作用，而IL-1β 和IL-6 则发挥促进炎症的作用。本文通过检测未经抗病毒治疗的乙型肝炎肝硬化患者外周血Treg 细胞及其亚群频率和血清IL-1β、IL-6 和 IL-10 水平，以探讨其临床意义。

对象与方法

一、研究对象 选取我院2010年3月至2010年9月间收治的38 例乙型肝炎肝硬化（LC）患者、17 例慢性乙型肝炎（CHB）患者和20 例正常健康对照者。诊断符合我国2000年修订的《病毒性肝炎防治方案》[2]和2005年《慢性乙型肝炎防治指南》[3]。

二、Treg 细胞及其亚群频率和血清IL-1β、IL-6、IL-10 水平的检测 采集入组人群外周抗凝血10ml，用淋巴细胞分离液（中国医学科学院生物工程研究所）分离出外周血单个核细胞（PBMC），每管取1×106PBMC 进行细胞染色，第一管加入抗CD4-藻红蛋白（PE，美国 BD Pharmingen 公司）、抗CD25-多甲藻叶绿素蛋白（Percp，美国 BD Pharmingen 公司）；第二管加入抗 CD4-PE、抗CD39-PE（美国BD Pharmingen 公司）。破除细胞膜后，第一管加入抗Foxp3-异硫氰酸荧光素（FITC，美国ebioscience 公司），第二管加入抗Foxp3-FITC和抗 CTLA-4-别藻青蛋白（APC，美国 BD Pharmingen公司）进行细胞内染色。运用ACSCalibur 型流式细胞仪（美国，BD 公司）进行细胞检测，用FlowJo5.7 for windows 软件进行图像分析，计算CD4+CD25+Foxp3+细胞占CD4+T 细胞的百分比作为Treg 细胞频率；分析CD39+CD4+Foxp3+细胞（CD39+Treg 细胞）与 CTLA-4+CD4+Foxp3+细胞（CTLA-4+Treg 细胞）分别占CD4+Foxp3+细胞的百分比，作为Treg 细胞亚群的频率。采用ELISA 法检测血清 IL-1β、IL-6 和 IL-10 水平（美国 RB 公司）。

三、临床指标检测 血生化、凝血功能、HBV M和HBV DNA 均在本院临床检验中心常规进行。

四、统计学方法 应用SPSS13.0 软件进行分析。计量资料用±s 表示，对符合正态分布资料的均数间比较应用t 检验，对不符合正态分布的资料应用秩和检验。……