张茗

(大连市妇产医院产科五病房，辽宁大连116033)

胎膜早破胎膜中白细胞介素18的表达及其临床意义

张茗

(大连市妇产医院产科五病房，辽宁大连116033)

［目的］探讨白细胞介素18(interleukin-18，IL-18)作为诊断胎膜早破(premature rupture of membrane，PROM)生物学标志的可能性。［方法］应用免疫组织化学SP法检测42例PROM患者及28例正常产孕妇胎膜的IL-18表达，并加以比较。［结果］PROM胎膜中IL-18表达明显高于正常胎膜组织(P＜0.05)。合并亚临床绒毛膜羊膜炎PROM胎膜组织的IL-18表达明显高于不合并绒毛膜羊膜炎组织(P＜0.05)。IL-18的表达与胎膜早破时间无明显相关性。［结论］IL-18作为一种细胞因子有可能成为PROM的预测性指标。

白细胞介素18;胎膜早破;免疫组织化学

胎膜早破(premature rupture of membrane，PROM)是妊娠期常见并发症之一。导致胎膜早破的因素很多，其中感染是最常见的原因，多为生殖道病原微生物上行引起的亚临床感染，如出现明显的临床症状及体征再予治疗，多为时已晚。白细胞介素18(interleukin-18，IL-18)是近年发现的一种新的细胞因子［1］，其生物学活性与白细胞介素12(interleukin-12，IL-12)非常相似，但其诱生γ-干扰素的能力要强于IL-12。近年来诸多研究证实，IL-18具有多种生物学效能，能促进多种细胞因子的分泌。IL-18在免疫调节、抗感染、变态反应性疾病发病过程中发挥着重要的作用。

本实验应用免疫组织化学SP方法对IL-18在PROM胎膜中的表达进行研究，探讨 IL-18与PROM发生的关系，并且分析 IL-18作为诊断PROM生物学指标的可能性。

1 材料和方法

1.1 标本来源

选取2008年3月—2008年12月于大连市妇产医院产科住院，足月分娩的单胎初产妇共70例，其中正常孕妇者28例，PROM患者42例。42例PROM病例中，10例合并亚临床绒毛膜羊膜炎，32例非绒毛膜羊膜炎。胎膜早破＜12 h者20例，12～24 h者15例，＞24 h者7例。所有孕妇均实行剖宫产，术中直视下宫颈内口取胎膜2 cm×2 cm，蒸馏水冲洗后，置于10%福尔马林中固定，石蜡包埋备用。

1.2 免疫组织化学

将蜡块制成5 μm厚的切片。经水化，阻断内源性过氧化物酶活性，用非免疫牛血清阻断非特异性抗原后，加IL-18抗体(博士德公司)，室温下孵育90 min。滴加生物素化二抗，室温下孵育10 min，再滴加SP复合物，室温下孵育10 min。各步骤之间均用PBS缓冲液洗3次，DAB显色后加入苏木素复染。阴性对照省略第一抗体，用PBS缓冲液代替。

1.3 结果判断标准

阳性表达为棕黄色颗粒，有胞浆染色的细胞定义为阳性细胞。在光镜下随机观察10个高倍视野，细胞胞浆内基本未着色为(-);胞浆内着色为浅黄色，阳性细胞数＜25%为(+);胞浆内着色为棕黄色，阳性细胞数介于25%～50%之间为(++);胞浆内可见棕黄色颗粒，阳性细胞数＞50%为(+++)。

1.4 统计学方法

采用SPSS for Windows 11.5统计分析软件进行分析。对IL-18的表达与临床病理特征的关系采用卡方检验和确切概率法，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 PROM组和正常孕妇组胎膜中IL-18的表达

IL-18在PROM胎膜中主要定位于绒毛膜和羊膜细胞的胞浆(图1、2)，正常孕妇胎膜中IL-18无表达或者表达较弱(图3)。经连续性卡方检验，两者之间的差异有显著性意义(χ2=9.502，P＜0.05)。见表1。

图1 IL-18在PROM非绒毛膜羊膜炎中为阳性表达(SP×100)Fig 1 Positive expression of IL-18 in PROM without sub-clinical chorioamonitis(SP×100)

图2 IL-18在PROM合并亚临床绒毛膜羊膜炎中为强阳性表达(SP×400)Fig 2 Highly positive expression of IL-18 in PROM with subclinical chorioamonitis(SP×400)

图3 正常组织中IL-18的表达较弱(SP×400)Fig 3 Poor expression of IL-18 in normal tissue(SP×400)

2.2 PROM组合并亚临床绒毛膜羊膜炎和非绒毛膜羊膜炎胎膜中IL-18的表达

IL-18在PROM合并亚临床绒毛膜羊膜炎胎膜中的表达明显高于PROM非绒毛膜羊膜炎组，两者之间的差异具有显著性意义(χ2=10.428，P＜0.05)。见表2。

表1 PROM组和正常孕妇组胎膜中IL-18的表达Tab 1 Expression of IL-18 in PROM and Normal Tissues (n)

2.3 胎膜中IL-18的表达与胎膜早破时间的关系

随时间延长，PROM胎膜中IL-18的表达差异无显著性意义(P＞0.05)。见表3。

表2 PROM合并亚临床绒毛膜羊膜炎和非绒毛膜羊膜炎胎膜中IL-18的表达Tab 2 Expression of IL-18 in PROM with and without Sub-clinical Chorioamonitis (n)

表3 胎膜中IL-18的表达与胎膜早破时间的关系Tab 3 The Relationship with the Expression of IL-18 and the Time of PROM

3 讨论

PROM是妊娠期常见的并发症，足月PROM发生率为 10%，足月前 PROM发生率为 2.0%～3.5%［1］。严重危及母儿健康，足月前PROM往往导致不可避免的早产。

导致PROM的因素很多，其中感染与胎膜早破的关系密切，胎膜因炎性细胞因子浸润而水肿、脆性增加易于破裂。细菌感染后可产生多种酶类、自由基和细胞因子，参与PROM的发生。细胞因子刺激母体及胎儿的多形核白细胞产生并激活溶酶体，破坏胎膜组织。

当发生PROM时，感染或炎症过程中产生的细胞因子，细菌产生的脂多糖、松弛素、细胞凋亡等增加，诱导基质金属蛋白酶(MMPs)的合成和活化，尤以破膜处明显，使其抗张力及弹性变形能力下降［2］。在PROM孕妇胎膜局部区域中可观察到大量凋亡的羊膜细胞分散存在，而在剖宫产孕妇胎膜中仅发现有少量凋亡细胞存在，提示PROM与细胞凋亡有关［3］。

Menon等［4］研究证实，羊水中的IL-18，足月前胎膜早破患者较足月产显著增高。Fortunato等［5］研究表明PROM患者羊水中IL-18水平较未破膜者显著升高，且羊膜腔内感染患者其羊水中IL-18水平较未感染者明显升高。IL-18又称γ-干扰素诱导因子，最先是Okamura等于1995年发现在鼠的脾细胞中能激活自然杀伤细胞，可诱导产生γ-干扰素的诱导因子，枯否氏细胞核激活的巨噬细胞中可检测到其基因的表达［6］。IL-18能促进凋亡发生和炎症反应。PROM时羊水中的IL-18作为一种前凋亡因子明显上升。绒毛膜和蜕膜来源的IL-18，在PROM患者中升高，同时IL-18诱导了羊膜绒毛膜Fas的表达。在许多疾病中，IL-18明显升高，且能刺激多种细胞产生MMPs，降解基底细胞膜。

本研究显示PROM组胎膜中IL-18的表达明显高于正常孕妇组。PROM组中合并亚临床绒毛膜羊膜炎者胎膜IL-18表达强度较无绒毛膜羊膜炎者显著升高。可能是由于胎膜局部感染刺激绒毛膜滋养层细胞合成IL-18增加，而IL-18的增加可能刺激有关细胞释放MMPs，降解基底细胞膜和/或IL-18通过诱导羊膜绒毛膜Fas的表达，促使细胞凋亡增加，两方面的作用均减弱胎膜强度，增加胎膜脆性，最终引起胎膜破裂。

PROM患者胎膜中IL-18水平明显高于正常对照组，这一趋势在破膜早期即明显表现出来，且与破膜时间无相关性。推测在没有炎症因素的干扰时，IL-18通过促进Th1型因子合成，使Th1/Th2型细胞因子失衡，导致PROM。由于这种作用并不随着破膜时间的延长而增加，说明免疫的异常在破膜未发生时既已存在，因而IL-18有可能作为一种对PROM的预测性指标。

［1］乐杰.妇产科学［M］.第6版.北京:人民卫生出版社.2006.145-146.

［2］胡艳.基质金属蛋白酶和胎膜早破的关系［J］.国外医学妇幼保健分册，2003，14(2):77-80.

［3］Locksmith GJ.Amniontic fluid concentrations of matrix metalloproteinase 9and tisser inhibitor lf metalloproteinase 1during pregnancy and labor［J］.Am J Obstet Gynecol，2001，184(2):159-164.

［4］Menon R，Lombardi SJ，Fortunato SJ.IL-18，a product of choriodecidual cells，increases during premature rupture of membranes but fails to turn on the Fas-FasL-mediated apoptosis pathway［J］.J Assist Reprod Genet，2001，18(5): 276-284.

［5］Fortunato SJ，Menon R.Distinct molecular events suggest different pathways for preterm labor and premature rupture of membranes［J］.Am J Obstet Gynecol，2001，184(7): 1399-1405.

［6］Nakanishi K，Yoshimoto T，Tsutsue H，et al.Interleukin-18 is a unique cytokine that stimulates both Th1 and Th2 responses depending on its cytokine milieu［J］.Cytokine Growhe Factor Rev，2001，12(1):53-72.

Expression and clinical significance of interleukin-18 in premature rupture of membrane

ZHANG Ming
(The Fifth Department of Gynecology and Obstetrics，Dalian Obstetrics and Gynecology Hospital，Dalian 116033，China)

［Objective］To detect expresson of interleukin-18(IL-18)in the tissne with premature rupture of fetal membrane(PROM)and clinical pathological significance of the expression.［Methods］The expression of IL-18 was detected in 42 tissues with premature rupture of fetal membranes and 28 normal of fetal membrane tissues without by immunohistochemistry.［Results］The expression of IL-18 was significantly higher in premature rupture of membrane than that in normal(P＜0.05)，and the expression of the tissues in PROM with sub-clinical chorioamonitis was significantly higher than that without(P＜0.05).The correlativity between the expression of IL-8 and the time of PROM was not clear(P＞0.05).［Conclusions］The IL-18 could become a predictable index of PROM.

interleukin-18;premature rupture of membrane;immunohistochemistry

R714.259

A

1671-7295(2012)04-0352-03

2012-02-24;

2012-05-20

张茗(1978-)，女，辽宁大连人，硕士，主治医师。E-mail:lingfeng887463@sina.com