纪 军，张 利，桑丽敏，林海龙，何学志，吴园园，颜培实，孙喜琢

(大连市中心医院中心实验室，辽宁大连116033)

成人自体心肌干细胞体外高效扩增及特异性鉴定

纪 军，张 利，桑丽敏，林海龙，何学志，吴园园，颜培实，孙喜琢

(大连市中心医院中心实验室，辽宁大连116033)

［目的］建立一种稳定、高效的成人自体心肌干细胞体外培养扩增及特异性鉴定方法。［方法］手术中取下的心脏组织标本，通过胶原酶消化的方法获得细胞，使用自体血清进行贴壁培养和传代的方法纯化细胞，细胞增殖至3代后进行RT-PCR基因表达检测，流式细胞表面标记检测及染色体核型分析的鉴定。［结果］通过本实验的方法可以在成人心肌组织中分离和纯化心肌干细胞，并在体外可大量增殖，至3代细胞可增殖至5×107。RT-PCR鉴定其具有全能干细胞因子Nanog、Oct-4、Sox-2、Rex-1的mRNA表达，及心肌转录因子Nkx2.5和GATA4的mRNA和蛋白表达;表达间质干细胞表面标记CD29、CD90、CD105;不表达造血干细胞表面标记CD45和人免疫抗原HLA-DR;且培养后46条染色体无移位和缺失等染色体突变。［结论］通过本研究确立了一种稳定、高效的成人自体心肌干细胞体外培养，扩增和特异性鉴定的方法，为自体心肌干细胞移植技术的临床应用奠定重要的基础。

自体组织;心肌干细胞;基因表达;流式细胞术;核型分析

传统观点认为心脏是高度分化器官，没有再生能力;心肌细胞是终末分化细胞，是不可再生的细胞。胎儿出生后的心肌细胞已永久性的退出细胞周期，在心肌损伤后不能自我更新和修复坏死心肌，心脏只能通过心肌细胞肥大来适应心脏负荷的增加，心肌受损后心肌组织被瘢痕组织取代，最终导致心脏收缩功能的不可逆损伤。……