孔 涛，张月芹

(1．山东省济宁市妇幼保健院，山东 济宁 272100;2．山东省鱼台县妇幼保健院，山东 济宁 272300)

复方芩兰口服液是由金银花、连翘、黄芩、板蓝根4味中药组方，具有辛凉解表、清热解毒之功效，用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛。现行质量标准中未对方中主要药味连翘进行含量测定。为了提高并有效地控制药品质量，现采用高效液相色谱(HPLC)法测定连翘中连翘苷的含量，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪;Agilent色谱工作站;BT25S型赛多利斯电子天平(d=0．01 mg)。乙腈、甲醇为色谱纯;水为纯化水，其他试剂为分析纯;连翘苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110821－200711);复方芩兰口服液(黑龙江省某制药厂，批号分别为 20101104，20101201，20101211)。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:乙腈 － 水(25 ∶75);检测波长:278 nm;流速:1．0 mL/min。理论板数以连翘苷峰计算不低于3 000;连翘苷峰与相邻峰的分离度R大于1．5。在此条件下，色谱图见图1。

2．2 溶液制备

精密称取干燥至恒重的连翘苷对照品Ws=0．015 25 g，置25 mL的容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液。精密量取1 mL，置10 mL容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度作为对照品溶液。精密量取本品1 mL，置中性氧化铝柱(100～200目，6 g，内径为1 cm)上，用70%乙醇40 mL洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加50%甲醇溶解转移至25 mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过作为供试品溶液。按处方工艺制备不含连翘的样品，同供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

线性关系考察:精密吸取对照品贮备液1，2，3，5 mL，置10 mL容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，照上述色谱条件进样，以峰面积(A)为纵坐标、对照品进样量(C)为横坐标绘制标准曲线，得连翘苷回归方程为A=618．8C+24．2，r=0．999 5。结果表明，连翘苷进样量在1．22～12．2 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:分别精密吸取同一对照品溶液，连续重复进样5次，测定峰面积。结果的RSD=0．67%(n=5)。

稳定性试验:取同一供试品溶液，每2 h进样1次。结果峰面积的RSD为1．3%，表明供试品溶液中连翘苷在8 h内稳定。

重复性试验:分别取同一批号样品5份，按样品溶液制备方法操作，测定连翘苷峰面积。结果的RSD=0．62%(n=5)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品6份，加入一定量的连翘苷对照品，依法测定，计算回收率，结果见表1。

表1 连翘苷加样回收试验结果(n=6)

2．4 样品含量测定

取不同批号样品，按拟订方法试验，另取连翘苷对照品溶液，照上述色谱条件测定。结果见表2。

3 讨论

依据2010年版《中国药典(一部)》附录ⅩⅧA[1]中药质量标准分析方法验证指导原则进一步完善了复方芩兰口服液的质量标准。取连翘苷对照品溶液在200～400 nm波长之间进行紫外光谱扫描，测得其最大吸收波长为278 nm，故以278 nm为检测波长。

表2 样品含量测定结果(n=3)

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京:中国医药科技出版社，2010:130．