王丽萍，段晓颖，孙广科

(河南中医学院第一附属医院，河南 郑州 450000)

复发性口腔溃疡是口腔科常见病、多发病，患病率高达25%。现代医学认为，其发病与免疫功能低下、细菌与病毒感染、内分泌失调、自主神经功能和消化道功能紊乱有关。中医认为，该病与脾胃实热、心火上炎、阴虚内热、湿热内蕴、阴虚湿热夹杂导致灼伤营血、腐蚀肌膜有关，或与脾肾阳虚、脾胃气虚、寒热错杂所致温化湿调、津液停滞、寒湿困于口腔，肌膜溃烂有关。西药中用于治疗口腔溃疡的膜剂多以激素或抗生素类为主要成分，而口腔溃疡易反复发作，长期使用，副作用较大，临床依从性差。基于此原因，我院研制了治疗口腔溃疡的中药膜剂愈溃膜。愈溃膜为生物黏附单向释药膜剂，由胡黄连、牡丹皮等组方，具有清热凉血、活血散瘀的功能。该贴膜由具生物黏附性的载药层和不具生物黏附性的背衬层复合而成，口腔黏附时间长，同时能阻断外界对溃疡面的刺激，载药层单向释药，减轻了药物苦味，维持了药物局部的有效治疗浓度，临床治疗效果较好。

1 材料与方法

1．1 仪器、试药与菌株

CP225D Sartorius十万分之一天平(德国赛多利斯＜北京＞有限公司);SXK－103型净化工作台(安徽省蚌埠净化设备厂);SW－CJ－IB型单人单面净化工作台(苏州净化设备有限公司);电子天平(上海医用激光仪器厂常熟分厂，型号为DT－300A);LMQ－R立式灭菌器(山东新华医疗器械股份有限公司);PYXDHS－50X65－BS－Ⅱ隔水式电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂);MJ－160B－Ⅱ霉菌培养箱(上海跃进医疗器械厂)。

愈溃膜(由本院提供，批号为101123，每片含原生药0．036 g);蜂胶口腔膜(北京紫竹药业有限公司，批号为20100913)。

乙型溶血性链球菌(32210－4a)、甲型溶血性链球菌(32213－8)为冻干菌粉，均由中国药品生物制品检定所提供;金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]、大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]、铜绿假单胞菌 [CMCC(S)10104]、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]，均为斜面保存第2代菌种，由河南省食品药品检验所提供。

营养肉汤培养基(批号为110126)、MH琼脂培养基(批号为100611)、MH 肉汤培养基(批号为 100428)、pH=7．0氯化钠 － 蛋白胨水缓冲液(批号为1007082)、营养琼脂培养基(批号为100428)、改良沙氏琼脂培养基(批号为110301)均由北京三药科技开发有限公司提供。沙氏葡萄糖液体培养基系按2010年版《中国药典(一部)》附录ⅩⅢ微生物检定项下规定配制。

氯化钠注射液(河南太龙药业股份有限公司，批号为10091321);无菌脱纤维绵羊血(郑州益康生物工程有限公司，批号为20110408);标准胎牛血清(上海尚宝生物科技有限公司，批号为100402);血琼脂平板(河南联博生物科技有限公司)。

1．2 方法[1-2]

菌种活化:用灭菌吸管将液体培养基约0．3 mL分别注入被启开的甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌菌种安瓿中并吹打，使冻干菌种溶解成菌悬液;将上述菌悬液全部吸出，分别接种到含5%无菌脱纤羊血的10 mL营养肉汤培养基中，(35±1)℃，5%CO2培养20 h，制成第1代菌种;再将第1代菌种传代培养，复壮活化至第2代，备用。接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的斜面培养物置营养肉汤培养基中;以上各菌均置细菌培养箱中，在(35±1)℃温度环境下培养20 h;接种白色念珠菌于沙氏肉汤培养基中，置霉菌培养箱中，在(25±1)℃温度环境下培养24 h。

溶液制备:取上述各菌的新鲜培养物1 mL加无菌生理盐水，按1∶10倍比稀释至1∶1 000，制成菌悬液，备用。准确称取愈溃膜、蜂胶口腔膜，用灭菌纯净水稀释成质量浓度为1 000 g/L的供试液，备用。

最低抑菌浓度(MIC)测定:取13 mm×100 mm灭菌具硅胶塞试管132支，排成12排，每排11支;在每管中加相应无菌培养基2．0 mL(其中甲型溶血性链球菌和乙型溶血性链球菌培养液需加入5%胎牛血清)，于第1管中加供试液 2．0 mL，按二倍稀释法[1－2]倍比稀释成系列浓度，编号为1－11的试管中药液最终质量浓度依次为500，250，125，62．5，31．3，15．6，7．8，3．9，1．95，0．98，0 g/L(第11管不加药，为阳性对照管)。向各管中加供试菌悬液0．1 mL(其中第10管不加菌液，为药液对照管)，培养24 h后(白色念珠菌可适当延长培养时间)，观察记录，重复试验2次。

结果判断:本试验中，以第10管(药液对照管)对应的平板无菌生长;第11管(阳性对照管)对应平板有菌生长，结果方为有效。观察结果，找出阻止细菌生长的最低药物质量浓度(MIC)。将无菌生长的最低药物质量浓度及其邻近两管划线接种于相应的琼脂平板上，适当培养;取出，观察有无细菌生长，有细菌生长的记为“+”，无细菌生长的记为“－”;低于5 cfu/mL者按“－”计。结果以细菌不生长的最低质量浓度为药物的最低抑菌浓度(MIC)。

2 结果

结果见表1。愈溃膜对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌的最低抑菌浓度分别为 31．3，7．8，62．5，62．5，3．9，3．9 g/L。蜂胶口腔膜对大肠埃希菌在试验浓度范围内无抑制作用，未找到最低抑菌浓度;对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度为3．9 g/L;对铜绿假单胞菌在试验浓度范围内无抑制作用，未找到最低抑菌浓度;对白色念珠菌的最低抑菌浓度为62．5 g/L;对甲型溶血性链球菌的最低抑菌浓度为7．8 g/L，对乙型溶血性链球菌的最低抑菌浓度为3．9 g/L。体外抑菌试验表明，愈溃膜对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌在试验浓度范围内抑菌效果明显优于蜂胶口腔膜，后者对上述2种菌均不敏感，几乎无抑制作用;对于其余4种菌，两者最低抑菌浓度接近，无明显差异，其中愈溃膜对甲型溶血性链球菌的抑菌效果稍优于蜂胶口腔膜，对于乙型溶血性链球菌、白色念珠菌二者抑菌效果相当，对金黄色葡萄球菌的抑菌效果蜂胶口腔膜略优。

表1 药物对6种细菌的抑制作用

本次试验中，以试验药物的质量浓度的最低抑菌浓度作为对比指标，以片换算最低抑菌浓度，比较单片愈溃膜与蜂胶口腔膜的体外抑菌力。结果见表2。试验中，样品药物愈溃膜的单片质量为0．028 g，而蜂胶口腔膜的单片质量约为0．016 1 g，故同样质量浓度的试验液中，蜂胶口腔膜的片数多于愈溃膜，即对于抑制同样浓度的试验菌液，单独1片的愈溃膜的体外抑菌作用优于蜂胶口腔膜。该制剂临床应用1年来，疗效观察结果显示其治疗有效率非常高，见表3。若病程3 d以内者用药，治愈率可达100%。

表2 以片数换算的最低抑菌浓度(片/mL)

表3 愈溃膜对复发性口腔溃疡的疗效[例(%)]

3 讨论

虽然口腔溃疡本身并不是由细菌感染引起的疾病，但往往合并细菌感染。因此，抗菌消炎在口腔溃疡的治疗中尤为重要。愈溃膜组方严谨，配伍精妙，方中多种成分如胡黄连[3－4]、牡丹皮[5－6]、冰片[7]等都有一定的抑菌抗炎作用。其中冰片易透过细胞壁，引起细胞膜损伤，破坏及改变其通透性[8]，冰片中的主要成分龙脑与异龙脑均能抑制炎症介质释放及拮抗前列腺素。另外，愈溃膜体外释放试验结果显示，其释放符合Higuch方程，属于缓释膜剂，使药物作用时间延长，其具有的清热解毒、生肌敛疮的作用通过药效成分在病损部位直接与细菌接触，缓慢释放，维持病损部位保持有效的药物治疗浓度，从而发挥抑菌作用，控制局部感染，加速炎症消退及黏膜修复，缩短溃疡面愈合时间。相比西药，愈溃膜具有整体调节、多靶点治疗的特点，在治疗口腔溃疡方面有其独到之处。

试验表明，愈溃膜对上述6种菌有较好的抑制作用，对治疗复发性口腔溃疡达到了标本兼治的目的，有着较高的临床实用价值和广泛的市场前景。

愈溃膜对口腔溃疡的治疗机理还需进一步研究，今后应从临床研究、药物代谢动力学及分子生物学的角度进一步探讨其作用机理。

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