赵丽娟 陈源红 唐华英 韦红玉 曾 怡

(右江民族医学院微生物学与免疫学教研室，广西百色市 533000)

1型人类免疫缺陷病毒tat基因重组分泌型真核表达载体的构建▲

赵丽娟 陈源红 唐华英 韦红玉 曾 怡*

(右江民族医学院微生物学与免疫学教研室，广西百色市 533000)

目的构建人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)tat基因分泌型真核表达载体。方法聚合酶链反应(PCR)法从缺失pol基因的重组HIV-1基因组pNL4-3中扩增tat基因;将PCR获得的tat基因片段和pSecTag2B分泌型真核表达载体分别用Hind III酶切;pSecTag2B载体片段经小牛碱性磷酸酶去磷酸化后，用T4 DNA连接酶将tat基因与pSecTag2B载体片段连接过夜并转化感受态大肠杆菌DH5α，提取阳性克隆质粒进行Hind III酶切鉴定，并利用Nco I酶切鉴定克隆的tat基因反向。最后选取正向tat基因克隆质粒送基因测序。结果PCR扩增产物在1%琼脂糖凝胶上约320bp位置出现条带，与预期的324bp大小一致;经Hind III和Nco I分别酶切鉴定，获得2个正向克隆;正向克隆经测序，克隆的tat基因序列与Genbank中登记的HIV-1 tat基因100%同源。结论本研究方法可以成功地构建HIV-1 tat基因分泌型真核表达载体。

人类免疫缺陷病毒1型;tat基因;分泌型真核表达载体

人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1，HIV-1)Tat蛋白是HIV-1的反式激活因子，有2个外显子编码。tat基因的第一个外显子编码为72个氨基酸，是Tat的反式激活活性区;第二个外显子编码为Tat蛋白的羧基端，包含一个RGD基序，是Tat蛋白与受体αvβ3和α5β1整合素结合的部位。Tat蛋白是HIV-1病毒复制所必需的反式激活因子，已有研究证实Tat蛋白与HIV-1 RNA 5'端启动子上的反式激活反应元件(trans-activation responsive element，TAR)结合［1］，激活 HIV-1 长末端重复序列(long terminate repeat，LTR)，使其下游的基因得以表达，从而促进整个HIV-1转录的表达。……