石 晶（综述），孔晓慧（审校）

（首都医科大学附属北京儿童医院儿科研究所免疫室，北京 100045）

聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）自从问世以来，经过几十年的发展，其在各项领域中的作用已愈显重要，特别是在各种病毒的快速准确检测中，更是以往的传统检测方法所不能比拟的。PCR的基本过程类似于DNA的天然复制，特异性依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物。整个过程由变性-退火-延伸3个基本反应步骤构成。通常，每完成一个循环需时2～4 min，2～3 h就能将靶核苷酸扩增放大几百万倍［1］。目前的PCR技术已有十几种，每种都有其优缺点，下面对各种PCR技术在病毒检测中的应用作简要综述。

1 反转录聚合酶链反应（reverse transcript PCR，RT-PCR）

RT-PCR是提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用反转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的敏感度提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于:分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。采用敏感性较高的RT-PCR方法，总的病毒检出率提高，且检测的病毒种类比较多，对目前报道的可引起儿童呼吸道感染的9种常见病毒病原包括新发现的人类博卡病毒均能进行检测［2］。

2 PCR-免疫

在常规的分子生物学中，对PCR扩增的产物的分析主要是采用琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳，溴化乙锭染色，在紫外灯下观察、拍照。这种方法简单经济，但是其缺点是存在假阴性、假阳性，溴化乙锭污染环境，紫外线伤害人体，只能进行定性或半定量分析，不能准确定量［3］。……